结合态小分子配体NMR选择性检测新方法.pdfVIP

中国化学会第十六届有机分析与生物分析学术研讨会论文集 结合态小分子配体的NMR 选择性检测新方法 1，2 1 1 1* 1 孙鹏 ，蒋先旺 ，蒋滨 ，张许 ，刘买利 1 中国科学院武汉物理与数学研究所，波谱与原子分子物理国家重点实验室，武汉磁共振中心，武汉 430071 2 中国科学院研究生院，北京， 100049 zhangxu@wipm.ac.cn 摘 要：以小分子为观测对象的结合态配体的NMR选择性检测技术已被成功地用于药物筛 选和代谢组学研究，但是现有技术存在选择性低或操作复杂等缺点。我们建立了一种新的结 合态小分子配体的选择性检测方法。该技术操作简单，无需复杂的选择性脉冲设置，选择性 高，可用于药物的高通量筛选。 关键词：结合；小分子；核磁共振；选择性检测 中图分类号：O657.31 以小分子为观测对象的结合态配体的核磁共 2 结果与讨论 振（NMR ）选择性检测技术已被广泛应用于药物的 样品的常规1D 1H NMR 谱和我们的新技术检 选择性检测[1]。这种技术独具特色，能够从极为复 测谱的结果如图1 所示。 杂的混合体系中直接检测出与目标靶蛋白相互作 用的小分子配体，对靶蛋白的需求量少，无须同位 素标记，而且不受蛋白分子量的限制，因此适用于 高通量药物筛选。 但是现有的NMR 技术仍然存在灵敏度较低以 及操作复杂等问题。如NOE-pumping和STD等技术， 依靠的是大分子和小分子之间的NOE信息，因此对 于浓度较低的大分子灵敏度显然降低。而 1 waterLOGSY技术虽然灵敏度高，却依靠水的选择 图1.常规一维 H NMR 谱（上）和选择性检测谱（下）的比 性，需要高选择性脉冲以消除背景信号，操作复杂。 较 针对以上问题，我们建立了新的结合态物质的 从图1中可以看出，新技术选择性的检测了与 选择性检测技术。该技术依靠溶剂水本身的强辐射 HSA有相互作用的色氨酸信号（7.0— 10.2ppm）， 结合态小分子选择性 阻尼特性实现选择性激发，因此无需选择性脉冲设 而没有检测到非结合的葡萄糖信号（3.0—4.0ppm ）. 定，操作简单，实验效果稳定，可进行药物的高通 说明实验有比较理想的选择性，因此可能用于药物 量筛选。 的选择性筛选。 1 仪器与方法 感谢国家自然科学基金21075132 ），国 检测1HNMR谱 样品：0.1mM 白蛋白（HSA ）+2mM Tryptophan+ 家重大基础研究计划（2009CB918603 ）资助。 2mM Glucose 。 参考文献： NMR 实验均在配备有低温TXI探头的Bruker [1] Zhang X, Tang HR, Ye CH, Liu ML, Drug Discovery Today: Avance III 800谱仪上进行，实验温度：298K 。其中 Technologies, 2006, 3: 241-245 NOE 混合时间为1.4s，脉冲延迟时间2s ，采样次数 [2] D