重组人ADAM15去整合素区域蛋白抑制HeLa细胞de增殖及迁移.pdfVIP

侯 颖 ，等 ：重组人 ADAM15去整合素 区域蛋白抑制 HeLa细胞的增殖及迁移 inhibitioneffectofproliferationofHeLacellsarousedbyrhddADAM15wasreversedbyEGF，which is the agonist of MAPK signal pathways．Moreover，rhddADAM15 inhibited the growth and metastasisofHeLacellsxenograftin zebrafish．AlltheresultsshowedthatrhddADAM15inhibited theproliferationandmigrationofHeLacellsbyMAPK signalpathwayandthetargetmayexistboth onthecellsurfaceandinthecytoplasm． Keywords：ADAM15，disintegrin，proliferation，migration，MAPK，zebrafish 整合素金属蛋 白酶家族蛋 白 (adisintegrinand 素 ：购 自Gibco公司；胰蛋白酶 ：购 自碧云天公司；脂 metaIl0pr0teinase，ADAM)， 也 被 称 为 MDC 质体 Lipo2000：购于 Invitrogen公司：细胞实验用各 (Metalloproteinase／DisintegrirdCysteine—rich)，是一类 种孑L板 ：购 自Coming公司：SRB：购 自Sigma公司； 锚定于细胞膜表面的跨膜蛋 白家族 [1]．自1990年发 表皮生长 因子 (EGF)及 U0125：购 自Cellsignaling 现第一个家族成员 以来 2[1。迄今为止共有 23种 公 司 ；CM—Dil：购 自Invitrogen公 司 ；兔 源 抗 ADAM家族蛋白在人类基因中被发现。ADAM家族 rhddADAM15的一抗 ：由作者所在实验室制作保存 ： 蛋 白参与蛋白水解 、生长因子和细胞 因子的释放 、 辣根过氧化酶标记的羊抗兔二抗 ：购 自碧云天公 细胞外基质降解、细胞的融合、迁移、粘附及信号转 司；细胞周期试剂盒 ：购 自南京凯基生物 。 导等生物功能3J【。在病理学中，ADAM家族蛋 白亦参 1．2 实验方法 与了炎症和肿瘤的发生和发展 。ADAM家族蛋 白 1．2．1 细胞培养 细胞采用含 10％小牛血清的 中，ADAM15被发现与多种肿瘤的发生和发展密切 1640培养基 ．添加 1xlOU／L的青霉素和 100mg／L 相关 ，在多种实体瘤发生时 ，如 胃癌、肝癌、前列腺 链霉素，置于 37℃5％CO：培养箱培养。当细胞生 癌等，ADAM15的表达都会上调 _4_5】。另外 ，由于 长至所需要密度时用胰蛋 白酶消化处理 ，收集细 ADAM15的去整合素区域含有整合素结合位点 胞 ，计数并根据需要重悬成所需浓度。 RGD(arginine—glycine—asparti．精氨酸～甘氨酸一天冬 1．2．2 SRB法测细胞增殖 将细胞消化后计数 ．用 氨酸)序列。具有典型的药物分子靶点结构特征，因 含 10％d~牛血清的培养基稀释至 (0．6~o．8)xlO个几， 此有希望作为临床肿瘤诊断的标志物及药物设计 每孔 100 L铺于96孔板 ，培养 24h后 ，吸除培养 的靶点。 基 ，将含有不 同浓度的rhddADAM15、丝裂原活化蛋 人 ADAM15去整合素区域蛋 白由91个氨基酸 白激酶 (mitogen—activatedproteinkinases．MAPKs) 残基构成，相对分子质量为 9805，作者所在实验室 通路 的激动剂表皮生长因子 (EGF)及 MAPK通路 成功利用大肠杆菌表达系统表达并