川乌配伍黑豆、防风对酯型生物碱含量的影响.pdfVIP

其双酯型生物碱会水解去掉一个酯基,转化成单酯型乌头生物碱,如苯甲酰乌头 原碱(benzoylaconine)、苯甲酰次乌头原碱(benzoylhypaconine)和苯甲酰新乌 [5] 头原碱(benzoylmesaconine) ；单酷型生物碱，毒性小，仅为双酯型生物碱的 [6] 1/20 。本文通过研究川乌配伍黑豆、防风前后酯型生物碱含量的变化，来揭示 川乌配伍减毒的规律，报道如下。 1材料 岛津LC-20A高效液相色谱仪(LC-20AT泵、自动进样器、UV-VIS检测器),日 本岛津公司；台式低速离心机L-530型,湖南湘仪公司；CP225Dsartorius电子 天平,广州市正一科技有限公司；LE-500型电子天平,佛山市华天力电子天平厂； BRAND Transferpette S数字可调式移液枪（上海安谱科学仪器有限公司）。川 乌饮片（四川江油中坝附子科技发展有限公司），黑豆，（广州采芝林药店），防 风（广州杏园春药店），经由广州中医药大学赖小平教授鉴定为毛茛科植物乌头 Aconitum carmichaeli Debx.的干燥母根。乌头碱（批号：MUST购 于北京恒元启天化工技术研究院），次乌头碱（批号：MUST-120210303，购于北 京恒元启天化工技术研究院），新乌头碱（批号：110799-200505，购于中国药品 生物制品检定所），苯甲酰乌头原碱（批号：11794-201102，购于中国药品生物 制品检定所），苯甲酰次乌头原碱（批号：111796-200901，购于中国药品生物制 品检定所），苯甲酰新乌头原碱（批号：111795-200901，购于中国药品生物制品 检定所）。乙腈，色谱纯，德国MERCK试剂公司；其他试剂均为分析纯。水为去 离子重蒸水。 2方法与结果 TM 2.1色谱分析条件 色谱柱：InertSustain C 柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动 18 相：乙腈A-0.04moL乙酸铵溶液B（氨水调PH=10）；梯度洗脱：0-33min，27%-31%A， 33-42min，31%-46%A，42-52min，52-75min，46%-58%A，75-80min，58%-27%A。柱温：30 -1 ℃；流速：0.8mL˙min ；检测波长：235nm；记录时间：80min；进样量30μL。 2.2供试品制备 2.2.1 川乌单煎液的制备 精密称取过60目筛的川乌生药材细粉约5.0g，加10 倍量水，静置30min，沸水浴中回流30min，离心（2000r·min-1）5min，加10mL 水洗涤残渣离心，合并上清液，加氨水调PH=9-10，氯仿萃取3次，分别为40mL， 30mL，30mL，合并氯仿层，加25mL0.1%硫酸溶液萃取2次，酸水层加氨水调 PH=9-10，加乙醚萃取3次，分别为30mL，25mL，25mL，合并乙醚层于50℃下蒸 干，加0.01%盐酸甲醇溶解并定容与5mL容量瓶中，备用。 2.2.2 川乌与黑豆、防风配伍溶液制备 ①精密称取过60目筛的川乌与黑豆生药 材各约5.0g，②川乌与防风各约5.0g，③川乌与黑豆及防风各约5.0g，按“2.1” 项方法，自“加10倍量水”起操作制备。 2.2.3 阴性溶液制备 精密称取过60 目筛黑豆、防风生药材细粉各约5.0g，按 “2.1”项方法，自“加10倍量水”起操作制备。 2.3 对照品溶液制备 精密称取乌头碱 1.45mg，次乌头碱 1.88mg，新乌头碱 1.62mg，各置于2ml容量瓶中，加0.01%盐酸甲醇定容至刻度，精密分别量取 0.25ml，0.40ml，0.40ml置于10ml容量瓶，得到质量浓度分别为：18.130ug/ml， 37.600ug/ml，33.600ug/ml地3种双酯型生物碱对照品液。 精密称取苯甲酰乌头原碱1.93mg，苯甲酰次乌头原碱1.67mg，各置于2ml 容量瓶中，0.01%盐酸甲醇定容至刻度，精密称取苯甲酰新乌头原碱 3.15mg于 5ml容量瓶中，0.01%盐酸甲醇定容至刻度，得到质量浓度分别为：0.965mg/ml， 0.835mg/ml，0.630mg/ml的3种单酯型生物碱对照品液。 将双酯型生物碱过0.45μm微孔滤膜，进样25μL；