WT1基因增强子构建位点对WT1基因启动子转录活性的影响.pdfVIP

维普资讯 理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(2)：209—214 · 209 · [文章编号] 1000—4718(2008)02—0209—06 · 论 著 · WT1基 因增强子构建位点对 WT1基 因启动 子转录活性的影响：l： 胡绍燕 ， 陈子兴 ， 顾伟英 ， 赵 晔 ， 岑建农 ， 傅铮铮 ， 何 军 ， 谷 敏 (’苏州大学附属儿童医院，江苏 苏州 215003；苏州大学附属第一医院，江苏省血液研究所，江苏 苏州 215006； 苏州大学附属第三医院，江苏 常州213002) [摘 要] 目的：以WT1基 因启动子和增强子的功能片段为研究对象，探讨增强子构建在质粒的不同位点 对基因启动子转录活性的影响。方法：利用基因重组技术将WT1基因增强子的功能片段分别插入在 已含有WT1 基因启动子的质粒，pEWP的不同位点(MCS中的BamHI、EGFP终止密码后的NotI和SV40polyA位点后的4 Ⅱ) 中，将重组质粒转染慢粒白血病红白急变细胞株K562细胞、乳腺癌细胞株 MCF一7细胞和人类胚胎肾转化细胞株 293细胞，通过检测转基因细胞中EGFP的平均荧光强度来评估增强子对启动子的转录促进作用。结果：通过基因 重组技术分别构建了含有WT1基因启动子的载体 ，即pEWP，和含有WT1基因启动子和增强子的载体，即pEWPE、 pEWPD和pEWPA。流式细胞仪检测 EGFP的平均荧光强度 ，发现pEWPA在 293细胞和 K562细胞 中能够增强 WTl启动子的转录活性，而pEWPE和pEWPD则无增强作用。3者均不能在MCF7细胞中增强WTl启动子的转录 活性。结论：SV40polyA位点后插入增强子能够有效地增强启动子的转录活性，且具有细胞特异性。 【关键词] 启动子 ，WT1基因；增强子，WT1基因；插入位点 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Influenceofinsertedsite0fW T1enhanceron thetranscripti0nalactivity 0fW T1promoterin theplasmid HU Shao—yan ，CHEN Zi—xing ，GUWei—ying ，ZHAOYe ，CEN Jian—nong ，FU Zheng—zheng ，HEJun ，GUMin (。TheChildrensHospitalofSoochowUniversity，Suzhou215003，China；TheFirstAffiliatedHospitalofSoochowUniversi— ty，Suzhou215006，China； ThirdAffiliatedHospitalofSoochowUniversity，Changzhou213002，China．E—mail： hsy139@sohu．com) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheinfluenceofWT1(Wilms’tumorgene)enhancerinsertedatdifferentsite ofplasmidonthetranscriptionalactivityofWT1promoter．METHODS：WT1enhancerwasligatedintothevector，pEWP containingWT1promoter，atthesiteofBamHIlocatedinmuhiclonesite，NotI，attheendofstopcodeofEGFPand4 Ⅱ，downstreamofSV40polyadenylationsequence，respectively．TherecombinantvectorsweretransfectedintoK562，293 andMCF一7celllinesbylipofectaminandthemeanflu