司坦唑醇激活ERα调节雌激素受抑的青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖和分化.pdfVIP

· 1186· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(6)I：1l86_-1191 [文章编号】 lO00—4718(2009)06—1186—06 司坦唑醇激活 ER0c调节雌激素受抑的青春期大鼠 生长板软骨细胞的增殖和分化 朱顺叶 ， 余振华 ， 陈红珊 ， 李燕红 ， 潘思年 ， 马华梅 杜敏联 (中山大学附属第一医院 儿科，神经外科，广东 广州510089；中山大学附属第三医院儿科，广东 广州510630) [摘 要] 目的：探讨司坦唑醇(sT)对离体培养的促性腺激素释放激素拟似物(GnRHa)处理后青春期大鼠 生长板软骨细胞的增殖和分化的影响；研究sT是否经由雌激素受体 d(ERa)介导软骨细胞增殖和分化，以探讨sT 促进骨生长／成熟生物效应的机制。方法：MTI法和免疫组化法检测软骨细胞在不同浓度、不同时间sT处理后增 殖细胞核抗原 (PCNA)表达；Westernblotting分析 sT作用后 ERa的变化；分子动力学模拟方法预测 sT与ERa的 相互作用方式。结果：(1)sT以时效和量效作用方式分别对雌激素受抑的离体青春期大鼠生长板软骨细胞的增殖 呈双相型影响，在合适的剂量和疗程时，细胞增殖效应可达最好效果。(2)sT作用后磷酸化 ERa(P—ERa)水平 随时间增加而上调 ，于 10min时达峰值，后渐减。增加 sT浓度，P—ERa水平渐强，并在 10一mol／L一10 moL／L 时达峰值，后渐弱。阻断ERa和MAPKK，ST所致的P—ERa水平较未阻断时减弱。(3)分子动力学模拟结果：ST 与 1731一雌二醇一样均能与ERa的2个氨基酸残基 (Glu353、His524)发生较强的氢键作用。sT和1731一雌二醇与 ERa的结合力相当。结论：ST是雄激素的衍生物，但本研究结果显示其作用经ERa介导，包括了经典ERa的受体 途径和MAPK途径，实现其促长骨生长板软骨细胞生长和成熟的生物效应。分子动力学研究证实了sT能与ERa 产生特异性、稳定性结合。 [关键词] 软骨细胞；司坦唑醇；受体 ，雌激素 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Stanozololregulatestheproliferationanddifferentiation ofgrowthplate chondrocytesin theestrogen--inhibited adolescentratsthrough activa- tion ofERo[ ZHU Shun—ye ，YU Zhen—hua ，CHEN Hong—shan ，LIYan—hong ，PAN Si— nianI， MA Hua—mei．DU Min一1ian ． (DepartmentofPediatrics，DepartmentofNeurosurge0，TheFirstAffiliatedHospital，SunYat～senUniversity，Guang- zhou510089，China；DepartmentofPediatrics，TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUne~ity，Guangzhou 510630，China．E—mail：zhushuny@mail．sysu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：(1)Toobservetheeffectofstanozolol(ST)ontheproliferation，maturityanddifferentia- tionofthegrowthplatechondrocytesculturedinvitroofadolescentratstreatedwithgonadotropinreleasinghormonearia- logue(GnRHa)．(2)TostudyifSTmediatestheproliferation／differentiationofehondrocytesviatheestrogenreceptora (ERa)，andtoinvestigatethemechanismofthebiologic