酸洗脱血小板HLA-Ⅰ类抗原的研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(10)：1995—1999 · 1995 · [文章编号] 1000—4718(2011)10—1995—05 酸洗脱血小板 HLA—I类抗原的研究 刘相富 ， 邹 勇 ， 刘文达 ， 陆 英 ，覃雪玲 ， 李 芳。， 廖思红 ， 袁 青 ， 刘贵莲 ， 林哲生 ， 黎结芳 ，林东军 (中山大学附属第三医院 输血科 ，血液科，广东 广州510630) [摘 要] 目的：建立一种有效酸洗脱血小板表面 HLA—I类抗原的方法，评估最适的酸洗脱条件以及这一 技术临床应用的可行性。方法：血小板用不同pH值 (pH=2、3、5、7)的柠檬酸缓冲液在0oC进行酸洗脱，多色流式 细胞技术检测血小板表面HLA—I类抗原及 P一选择素 (CD62P)的表达 ，AnnexinV染色检测血小板的早期凋亡， 电阻法检测血小板的最大聚集率。结果：随着柠檬酸缓冲液pH值的降低(从pH=7到pH=2)，血小板表面HLA — I类抗原的表达显著减少，但同时血小板的活化率 (CD62P表达)和早期凋亡率(AnnexinV表达)均显著增加。 相对PBS处理 ，利用pH=3的柠檬酸缓冲液处理血小板可显著减少血小板表面 HLA—I类抗原的表达 (P 0．05)，尽管血小板活化率和早期凋亡率均显著增加 (均P0．05)，但其聚集功能未受显著影响(P0．05)。结论： 利用pH=3的柠檬酸缓冲液0℃洗脱血小板 HLA—I类抗原可作为预防血小板输注无效的方法进行尝试。这项 酸处理技术在临床应用前尚需进一步改进和标准化。 [关键词] 血小板 ；人类白细胞抗原；CD62P；细胞凋亡；酸洗脱 [中图分类号] R331．143 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．10．026 Establishmentand assessmentofa method for acid elution ofplatelet HLA classIantigens LIUXiang—fu，ZOUYong，LIUWen—da，LUYing，QINXue—ling，LIFang，LI— AOSi—hong，YUANQing，LIUGui—lian，UNZhe—sheng，LIJie—fang，LIN Dong—jun’ (。DepartmentofBloodTransfusion，DepartmentofHematology，TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity， Guangzhou510630，China，E—mail：lindon~unO168@163．com) [ABSTRACT] AIM：ToestablishaneffectivemethodforacidelutionofplateletHIAclassIantigens，nadtoe- valuatetheoptimalconditionandthefeasibilityofclinicalaDplicationoftheacid—elutiontechnique．METHODS：Plate- letsweretreatedwithcitricacidbufferatdifferentpHlevels(pH=2，3，5，7)．ExpressionofHLAclassInatigensand P—selectin(CD62P)ontheplateletsurfacewasnaalyzedbymuhicolorflowcytometry．Theproportionofearlyapoptotic plateletswas detectedbyAnnexinV staining．Th emaximum plateletaggregationratewasdeterminedbyelectrical imped— naeeaggregometry．RESULTS：WiththedecreaseinthepHlevelsofthe