稳定表达UT—A2的FRT细胞系的建立与鉴定.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(4)：803—806 · 803 · [文章编号] 1000—4718(2007)04—0803—40 稳定表达 UT—A2的FRT细胞系的建立与鉴定术 郭丽荣， 孟 艳， 赵 丹， 赵华山， 吕 斌， 杨宝学， 赵雪俭 (吉林大学基础医学院病理生理教研室，吉林 长春 130021) [摘 要] 目的：建立稳定表达尿素通道蛋白A2(UT—A2)的FRT细胞系，为寻找 UT—A2抑制剂提供细胞 模型。方法：通过真核表达质粒 一脂质体介导的方法，将 uT—A2cDNA与真核表达载体 pUB6／V5连接后的重组 质粒转染人FRT细胞，经稳定筛选建立稳定表达UT—A2的FRT细胞系。功能检测实验将细胞分为对照组和稳定 转染组 ，用2mol／L尿素负荷试验检测稳定表达uT—A2的FRT细胞膜的尿素通透性。结果：经BSD筛选21d后 得到稳定表达 uT—A2的细胞株；Westernblotting证实uT—A2蛋白稳定表达；免疫荧光分析结果提示uT—A2的 质膜定位。2mol／L尿素试验证实了该细胞系具有明显尿素通透性。结论：在非肾脏上皮细胞获得 了稳定质膜定 位表达UT—A2的FRT细胞株，该细胞株可用于uT—A2抑制剂的筛选。 [关键词] 尿素通道蛋 白；转染；尿素 [中图分类号] R363 [文献标识码] A ConstructionandidentificationofFRT celllinestablyexpressingUT—A2 GUO Li—rong，MENG Yan，ZHAO Dan，ZHAO Hua—shan，LU Bin，YANG Bao—XUe， ZHA0 Xue—jian (DepartmentofPathophysiology，BasicMedicineCollegeof inUniversity，Changchun130021，China．E—ma／／：pro_2@ edu．ca) [ABSTRACT] AIM：ToobtainanFRTcelllinethatcanstablyexpressureatransporterA2(UT—A2)nadpro- videacellmodelforscreeningUT—A2inhibitors．METHODS：FRTcellsstablyexpressingaquapofinsl(AQP1)and YFPweretransfectedwiththerecombinantplasmidpUB6／V5一UT—A2byeukaryoticexpressionplasmid—lipoplastmedi- atingpathway．ThestbaleUT—A2一FRTcelllinewasclonedbyselectionwithBSDandconfirmedbyWestern blottingand immunofluorescencestaining．Theureapemr eba ilityacrosstheplasmamembrna ewasdetectedbya2mol／Lurealysisas- say．RESULTS：WehaveobatinedastbaleUT—A2一FRTcellline．Western blottingnaalysisshowedthatUT—A2pro- teinWas expressedstbalyinthiscellline．TheimmunofluorescencesatiningdetectionindicatedUT—A2expressioninthe plasmamemb rnae．ItWas foundthatthereWas significna tureapermeabilityinthiscelllineby2mol／L urealysisassay． CONCLUSION：Weconstructedna FRTcel