重组人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的表达、纯化及免疫原性.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(6)：1245—1248 · 1245 · [文章编号] 1000-4718(2011)06—1245—04 重组人髓鞘少突胶质细胞糖蛋白的 表达 、纯化及免疫原性水 夏君慧， 翁益云， 李 佳， 张 旭 (温州医学院附属第一医院神经内科，浙江 温州 325000) [摘 要] 目的：建立人少突胶质细胞糖蛋白细胞外 Ig样结构域(MOG )的硫氧还蛋白(TrxA)融合表达系 统，探讨表达产物MOG 一TrxA融合蛋白的免疫原性。方法：(1)应用RT—PCR方法，以人脑组织的总RNA为 模板扩增出编码 MOG 的cDNA序列 ，将 MOG cDNA克隆到 TrxA融合表达载体 pET32a(+)中，重组质粒 pET32a—M0G 经表型筛选 、酶切鉴定及测序鉴定后，转化至 BL21(DEB)trxB一宿主菌 中经异丙硫代钠一8一D一 半乳糖苷 (IPTG)诱导表达，并通过金属鳌合亲和层析柱进行纯化。(2)C57BL／6小鼠分为MOG 一TrxA组(MOG 组)、硫氧还蛋白组(TrxA组)及正常对照组(NC组)，12只／组，各组以相应抗原乳剂免疫小 鼠制作实验性 自身免 疫性脑脊髓炎(EAE)模型后观察其临床神经功能和组织病理学改变 (HE染色和髓鞘Luxolfastblue染色)评价模 型质量。结果：(1)成功获取高产量32kDMOG 一TrxA融合蛋白，以包涵体形式表达 ，纯化后纯度达95％左右。 (2)MOG组小鼠75％(9／12)发病，于免疫后第 (12．14-I-2．04)d发病，呈慢性非缓解型病程；发病动物组织切片HE 染色和髓鞘染色显示不同程度炎性细胞浸润和髓鞘脱失。结论：成功建立人 MOGg【的TrxA融合表达系统，表达 产物MOG 一TrxA融合蛋白可作为免疫原诱导 EAE动物模型。 [关键词] 髓鞘少突神经胶质细胞糖蛋白；脑脊髓炎，实验性自身免疫性；多发性硬化 [中图分类号] R341．32 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．06．038 Expression，purificationandimmunogenicityofrecombinanthumanmye- lin0lig0dendrOcyteglycoprotein XIA Jun—hui，WENGYi—yun，LIJia，ZHANGXu (DepartmentofNeurology，TheFirstAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalCollege，Wenzhou325000，China．E—mail： drzhangxu@gmail．con) [ABSTRACT] AIM：Toconstructathioredoxin(TrxA)fusionexpressionvectorexpressingtheextracellularimmu- noglobulindomainofmyelinoligodendrocyteglycoprotein(MOG )andinvestigatetheimmunogenicityofMOG 一TrxAfu— sionprotein．METHODS：ThecDNA encodingMOG wasamplifiedfrom humanbraintissuebyreversetranscriptionpol— ymerasechainreaction．TheclonedMOG cDNAwasligatedintothethioredoxinfusionexpressionvectorpET32a(+)． RecombinantplasmidWB8trausfectedinto层coliBI21(DE3)trxB一，andwasinducedwithisopropyl一8一D—thiogalacto — pyranoside．TheMOG 一TrxA