手部细菌采样方法探讨.pdfVIP

手部细菌采样方法的探讨 黄育红林立旺周游陈路瑶陈祖毅 福建省疾病预防控制中心福建福州350001 摘要：目的建立一种能客观反映手部细菌菌量驹科学、统一的采样方法，能够较大限度的采集手 部的细菌，以便今后对手消毒剂的消毒效果进行评价。方法采用按手印法、棉签涂抹法、双指揉 搓法、五指摩擦法等不同方法对受试人员手部细菌进行采样。结果不同方法对受试者手部细菌进 行采样，采集菌量有很大不同，使用五指摩擦法进行采样结果最稳定，再现性好，回收菌量高而且 操作方便。结论五指摩擦法是对手部细菌的一种较科学和客观的采样方法。 关键词：手部细菌；采样方法 人类绝大部分活动是通过手来实施完成的，手与外界直接接触，会受到各种有害因子的侵犯， 特别是微生物会在无形中污染双手，并且通过双手导致疾病在人与人之间传播【1】。合理使用手消毒 剂进行手部的清洁和消毒是防止疾病传播的有效措施【2】。目前市场上手消毒产品品种繁多，如何对 这些手消毒产品的消毒效果进行统一评价【3】，首先应建立一种能客观反映手部细菌菌量的科学、统 一的采样方法，能够较大限度的采集手部的细菌，以便今后对手消毒剂的消毒效果进行评价。本文 作者对不同的手部细菌采样方法进行实验室探讨，现报告如下。 l实验方法 1．1人员选择：每次实验选择身体健康，手部皮肤完好无损的受试人员若干人，试验前使用无抗菌作 用的洗手剂洗手lmin，流动水冲洗干净后再用无菌巾擦干，然后每次试验时分别采用按手印法、棉 签涂抹法、双指揉搓法、五指摩擦法等不同方法对手部细菌进行采样。每个受试者可重复进行采样， 但每次试验时间间隔至少一周以上。 1．2按手印法：打开底部已倾注营养琼脂的无菌空白平皿，将一只手的大拇指和食指在营养琼脂表面 轻轻按压，然后将此平皿置370C恒温箱培养48h，观察菌落生长情况。 1．3棉签涂抹法：用无菌棉签在盛有TPS的试管中浸湿后对一只手从指跟到指端的手指曲面进行往 返两遍涂抹采样，然后以无菌操作方式将棉签棉花端剪入试管中进行活菌计数【4】。 1。4双指揉搓法：将一只手的大拇指和食指第一指关节上的手指曲面在盛有10mlTPS的平皿中浸湿 后，边揉搓边洗脱，持续时间lmin，将洗脱液进行活茵计数。 1．5五指擦洗法：将一只手五个手指头的曲面在盛有10mlTPS的平皿底部擦洗，擦洗时先张开五指 于平皿底部磨擦至五指并拢，再张开，重复上述动作，持续时间lmin，取洗脱液进行活菌计数。【5】 2结果 · 2．1我们采用不同方法对受试者手部细菌进行采样，采集菌量有很大不同，其中按手印法所采集的细 菌数量最少，仅有几个到几百个，而且印在琼脂表面的细菌在生长过程中容易弥散成团，难以计数。 棉签涂抹法所采集的细菌总数也比较少，波动范围较大，最小菌落总数只有170c剐只手，最大菌落 106 总数达到1．88xcfu／只手，这可能与采样过程中操作者棉签涂抹的轻重程度有很大关系。而双指 揉搓法和五指摩擦法结果较稳定，回收菌量高且操作方便，且五指摩擦法比双指揉搓法，采集菌量 相对会更高些。结果详见下表。 2．2我们对手部细菌进行采样后发现，不同受试者及不同的采样方法所采得的细菌种类都比较相同和 单一，我们将不同受试者采样所得细菌进行分离纯化后，经过微生物测定仪鉴定，均为革兰氏阳性 的沃氏葡萄球菌。 表不同采样方法对手部细菌的采样结果 按手印法 24 102 6 3 棉签涂抹法 24 2．758x103 170 L x 双指揉搓法 24 2．295x105 7．51x103 7 k 105 1．35x104 2朔鼢研加取 铲驴铲 五指擦洗法 40 3．967x 3讨论 3．1人体手部的细菌种类和数量繁多，可以分为暂居菌和常居菌两种【6】，暂居菌也称污染菌或过客 菌从，是手与其它物品接触时滞留在皮肤上的，这类菌群由环境污染的细菌组成，寄居在皮肤表层， 种类复杂多变，污染量多少不定，致病菌污染机会多，存留时间短，容易被机械摩擦或手消毒剂清 除和杀灭【_71。暂居菌采样时种类和数量受到环境因素的影响较大，不利于对手消毒剂的消毒效果进 行统一评价。因此进行暂居菌的消毒效果评价时，建议统一选用一种低致病性细菌譬如非致病性大 肠杆菌，以人工染菌的方式将一定数量的细菌对手部进行染菌，后再以一种统一方法进行消毒效果 评价，这样的评价结果才会比较客观。【5】常居菌为人体手部固有寄生菌，寄生在皮肤深层，长期在 人体生长繁殖，有的甚至与人体终身共存，种类变化少，条件致病菌多，耐药菌株多，不容易被机 械摩擦或手消毒剂清除和杀灭。因此手部常居菌是进行手消毒时需要重点考虑的细菌17J。据文献报 道，手部常居菌包括凝固酶阴性葡萄球菌、棒状杆菌类、丙酸菌属和不动杆