团头鲂PGPH α亚基基因5’端侧翼序列克隆及其表达载体的构建.pdfVIP

维普资讯 第15卷第4期 中国水产科学 VO1．15NO．4 2008年7月 JournalofFisherySciencesofChina Ju1Y 2008 团头鲂 PGPH 亚基基因5’端侧翼序列克隆及其表达载体的构建 曲宪成，周正峰，崔严慧，刘颖，胡萍华，金一春，尚婧堵 (上海海洋大学生命与科学技术学院，上海 200090) 摘要：首先运用 PCR．末端加尾法克隆了团头鲂 (Megalobramaamblycephala)脑下垂体糖蛋白激素a亚基 (Pituitary glycoproteinhormoneasubunit，PGPHa)基因5’端侧翼序列；然后利用生物信息学理论对该序列进行了序列分析；最 后在序列分析结果的基础上，构建了荧光素酶质粒表达载体。序列分析结果显示，克隆所得到的团头鲂PGPHa亚基基 因5’端侧翼序列长 1399bp；其序列中包含潜在的TATA盒、GC盒，以及ERE、TER 、CER 、PGBE等对PGPHa亚基基 因转录调控起重要作用的转录因子结合位点；启动子区域位于一40～10bp处。利用PCR方法扩增得到了全长 1439bp 以及 1120bp、532bp、173bp均包含转录起始位点下游40bp序列的缺失片段，并将其连接至pGL3．Basic报告基因载体， 成功构建了团头鲂PGPHa亚基基因5’端侧翼序列的表达载体，为进一步研究、分析其转录调控机制提供了基础。[中 国水产科学，2008，15(4)：550-558] 关键词：团头鲂；垂体糖蛋 白激素 a亚基；5’侧翼序列；启动子：表达载体 中图分类号：Q959 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2008)04—0550—09 高等脊椎动物腺垂体分泌 的促滤泡激素 因转录调控起着十分重要的作用 [6-11]，并且存在一 (Follicle．stimulatinghormone，FSH)、促 黄 体 激 些细胞、组织特异性调控元件 u 。国外学者对罗 素 (Luteinizing-homrone，LH)、促 甲状 腺 激 素 非鱼 驯、鲤 n 、大鳞大马哈鱼 ]、金鱼 ’等糖 (Thyroid-stimulatinghomrone，TSH)，以及胚胎滋 蛋 白激素D亚基基因转录调控进行了研究，但关于 养层细胞分泌的绒毛膜促性腺激素，都是糖蛋 白 鱼类 PGPH0【亚基基因转录调控 的研究尚未见报 激素家族成员 …。这4种糖蛋 白激素都是由0和【 道。鉴此，本研究利用PCR．末端加尾法克隆团头 D亚基以非共价结合组成。其中每种动物糖蛋 白 鲂PGPH0【亚基基因5’端侧翼序列，并在对其进行 激素的0【亚基是相 同的；而 p亚基则不同，p亚基 生物信息学分析的基础上构建了含有团头鲂PGPH 决定了每种激素的特异性 。鱼类和其他脊椎 0【亚基基因5’端侧翼序列表达载体，旨为进一步研 动物一样，它们的两种促性腺激素 (Gonadotropin 究鱼类PGPH0【亚基基因转录调控 的分子机制提供 hormone，GtH)，即GtHI和 GtHII ，也是由0【和 D 基础 。 两个亚基组成。GtHI和 GtHII的功能分别与哺乳 1 材料与方法 类的FSH和LH相似，对鱼类配子的形成起着十分 重要的作用 J。另一方面，在鱼类的腺垂体也同样 1．1 实验材料 存在促 甲状腺激素细胞，合成和分泌TSH。TSH刺 1．1．1 实验动物 团头鲂 1尾，购于上海松江水产 激 甲状腺组织合成和分泌 甲状腺激素，促进物质与 良种场，体质量 220g，体长 21cm，健康状况 良好。 能量代谢，促进生长和发育 。 1．1．2 试剂 末端