乙型肝炎病毒相关性肾病中C4d沉积特点及其意义.pdfVIP

福州总医院学报 2011年 3月第 l8卷第1期 · 35 · · lI1aiA~g．omJt-究 · 乙型肝炎病毒相关性肾病中 CAd沉积特点及其意义 王 晨 郑智勇 曾 玲 李 敏 乙型肝炎病毒相关性肾病 (HBV—GN)有多种病理类 男性42例，女性82例。年龄 5～84岁，中位年龄 33岁。 型，其中不典型膜型和膜增殖型HBV—GN的发病机理被 1．1．2 试剂 认为与乙型肝炎病毒抗原 (HBv—Ag)在 肾脏 中沉积有 第一抗体：兔抗人 Ie,A为 Dako公司产品，兔抗人 C4d 关 1【-2]，但乙型肝炎病毒相关性 IgA肾病 (IgAN)是否与 为美国Biomediea公司产品，CK7(or—TL12／30)、CD34 HBV—Ag沉积有关，目前仍有争议。 (OBEnd／10)、抗 HmAg (ZCH16)和兔抗 }Ⅱ3cAg购于中杉 补体片断CAd已被作为精确测定组织中体液免疫反应 金桥 公 司。EliVisionTM plus免疫组化 广谱试 剂盒和 一 种标志物。本文拟通过研究不同病理类型 HBV—GN 中 DouSPTM免疫组化双染色试剂盒均为 Maixin．Bio公司产 CAd沉积的特点，及其与 }丑3sAg和 HBcAg沉积物的关系， 品。XXⅣ型蛋白酶 (P803S)为美国Sigma公司产品，胰 并与相应病理类型的原发性 肾小球肾炎中ACd沉积的特点 蛋白酶为美国Sparks公司产品。 进行对比，探讨 HBv—Ag在不同病理类型}Ⅲv—GN中的 1．2 方法 致病作用。 1．2．1 免疫组化染色 1 材料与方法 石蜡切片脱蜡入水，0．01MpH6．0柠檬酸盐缓冲液 中 1。1 材料 高温高压抗原修复；CK7和 CD34染色不消化，}Ⅱ 和 1．1．1 标本 }{】3cAg染色用 0．05％XXIV型蛋 白酶消化 1mm-15sec引【， 此项研究为回顾性研究，选择本院肾穿刺标本的存档 CAd用 0．1％胰酶消化 45sec；浸入 3％H20210min，工作 蜡块 269例，要求每例标本中肾小球数量超过 10个，同时 浓度第一抗体在 37℃下孵育 2h，聚合物增强剂 37℃孵育 含有肾皮质、髓质组织。所有标本均作过 HE、PAS和 20rain，辣根过氧化物酶标记 的二抗 37*(2下孵育 30rain， PASM—Masson染色，免疫组化 tgG、IgM、IgA、C3c、 AEC显色。各步骤 问均用 0．01M pH7．2PBS洗涤切片。 AC c、Clq、Fibrinogen、HE~Ag和HBeAg染色，以及透射电 PBS代替第一抗体作为阴性对照。 镜检查，并经过两名资深的肾病病理 医生阅片，病理诊断 1．2．2 双标染色 标准按照 1995年 WHO肾小球疾病分类和 1997年 WHO 切片高温高压抗原修复，0．1％胰酶消化 lmin，浸入 IgA肾病病理分级 I1o] 3％H20210rain，兔抗人 IgA37℃孵育 2h’辣根过氧化物 各组选取例数相近，以便于统计对 比，包括：(1)HBV 酶标记的二抗 37℃孵育 30rain,AEC显色 ；双染色增强剂 — GN145例，其 中系膜增生型 (HBv—MSPGN)31例， lOmin，兔抗人ACd抗体 4℃孵育过夜，碱性磷酸酶标记的 IgAN型 (HBv—IgAN)32例 (WHOIV级)，毛细血管增 二抗 37℃孵育 1