神经修复学干预策略系列谈(三)——基因工程.pdfVIP

生国医垣终会挫经处登医蛭筮金==笠四屋全国垡麦太金迨塞堑缉 ·873· 物的排斥反应，这关系到移植物的存活，从而使治疗效果受到影响，给予免疫抑制剂会使功能改善 持久。 参考文献(略) 神经修复学干预策略系列谈(三) ——基因工程 李莹黄红云 生物工程包括基因工程、酶工程、细胞工程、微生物工程、和生物反应器工程等五个方面，而在中枢 神经修复治疗的研究和应用上，尤以前两项最为重要。而基因治疗首要解决的问题是，基因转移的方 式，所介导的载体以及受体细胞等问题。 一、基因工程简介 1．基因转移的方式：基因转移的方式主要有两种，即exvivo和invivo。Exvivo就是在体外将目的 基因导人受体细胞内，再将其植入机体，使其在体内表达，从而达到治疗或预防的目的。Invivo是将外 的实验研究中多数学者采用ex 一个新研究思路(Pearse等，2006)。 2．载体分类：基因治疗的关键技术在于能使外源基因进入靶细胞的载体，载体的选择是基因治疗 中至关重要的一步。也是影响基因治疗进展的主要因素。一个理想的载体应具有能在适当的启动子 控制下，将目的基因转向特定的靶细胞或靶组织、不激发炎症反应或免疫反应、能够根据不同治疗需求 短暂或长期在宿主体内表达、载体应易于构建和纯化、高滴度且不会引起插入突变或引发野生型病毒 污染。 载体主要分为两大类：病毒载体和非病毒载体。目前常用的病毒载体主要有逆转录病毒、腺病毒 点和局限性在于能产生免疫反应或细胞毒性，甚至致癌。非病毒载体可以克服病毒载体的不足，具有 低细胞毒性和低免疫反应等特性。非病毒载体包括脂质体、多聚体和裸DNA(也称质粒)等。 裸DNA转染效率低。作为生物学方法，有病毒载体介导的体内基因转染效率虽然较高，但由于病 毒载体有免疫原性，应用于临床治疗有很大的风险性。脂质体属于非生物学方法，没有类似病毒载体 的安全性问题，方法简单、免疫原性弱、容量大，比较适用于体内基冈治疗的途径。尤其是目前发现的 多价阳离子脂质体，转染效率较高。但该方法的主要不足是，有一定毒性和基因不能长期表达(易成腊 等，2004)。 作者单位：100144北京市虹天济神经科学研究院北京康复中心神经外科 (Meng等，2008)。其中以SCs和成纤维细胞应用较多。 4．应用方法：利用生物工程方法研究中枢神经修复治疗主要方法包括，各种神经因子基因工程，各 类必需酶基因工程，基因沉默，特异抗体。下文将对以上四类研究方法分别进行介绍。 (1)各种神经营养因子基因工程 中枢神经系统受害后，神经元、靶细胞或胶质细胞可分泌多种神经营养因子(NTFs)，通过靶源性、 自分泌、旁分泌方式与相应细胞上特异性受体结合，激发各种信号通路，发挥其特殊生物作用，然而当 这种保护作用不足以消除损害因素后，将导致广泛神经细胞死亡和(或)凋亡。各种NTFs在神经细胞 增殖、生长过程中起有重要作用。在治疗各种神经退行性疾病中，NTFs或表达他们的基因被捕入到功 能异常的细胞中可避免其机能障碍或死亡。在动物模型中，NTFs在很大程度上能促进损害后神经功 能恢复。采用NTFs基因工程对各种中枢性神经疾病和损害治疗的主要目的是通过改变损害区局部微 环境，达到促进神经元存活、内源性神经干细胞分化、轴突再生和侧芽、髓鞘化修补和神经功能修复。 目前用于中枢性神经修复基因治疗相关的神经营养素家族(NTFs)包括：神经生长因子(NGF)、脑源性 6)等。 神经生长因子(NGF)作为辅助神经元发育生长的一种蛋白，被发现与20世纪50年代早期。在中 枢神经系统中，神经生长因子在细胞发育间期及后的过程中表达。神经生长因子由胆碱能及基地前脑 神经元表达。这些细胞包括皮质区域的椎体细胞和神经胶质细胞。神经生长因子也在锥体细胞锯齿 状颗粒神经元及海马中间神经元中表达。 Schumacher等应用遗传学改变的成纤维细胞第一个研究神经生长因子在纹状体的保护作用 组成纤维细胞与不分泌组成纤维细胞相比，能显著减少兴奋性神经毒性损伤。损伤体积大小与增加纹 状体神经元数量成正相关。神经生长因子分泌性成纤维细胞在已知道的胼胝体同侧损伤区域具有同 样作用(蹦m等，1993)。然而，神经生长因子分泌型的成纤维细胞作用受限于植入区域，细胞移植对于 局部病变引起的纹状体对侧的病变区只能产生微不足道作用。神经生长因子(NGF)的作用在对反向 因表达可有效改善学习及记忆下降的现象，预防组织内胆碱能神经元的变性(Klein等，2000)，自体细