中药复方对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激及超微结构的影响.pdfVIP

第一篇 实验研究 words]Diabetic Chinese [Key Neuropathies；Oxidativestress；Ultrastructure；Traditional medicine 糖尿病周围神经病变是糖尿病最常见的慢性并发症，但病因和发病机制尚不完全清楚， 目前糖尿病周围神经病变(DPN)发病途径包括多元醇途径、蛋白激酶C(PKC)途径、氨基 已糖途径、晚期塘基化终末产物(AGEs)途径、脂肪代谢异常、生长冈子缺乏、神经轴突转 运失常、自身免疫等，但任一学说都无法单独对DPN的发病机制作出圆满的解释…。2005 年Bro’mlee幢’等提出了糖尿病并发症的统一机制学说，认为高血糖诱导的线粒体电子传递链 中过氧化物产生过量，是导致糖尿病各种并发症的各种不同的发病机制的关键。耱尿病状态 下，活性氧簇(ROS)糖尿病状态下，活性氧簇(ROS)的过度生成和氧化应激水平升高会通 过各种分子机制导致糖尿病并发症啼’。同时机体抗氧化能力-卜．降，可直接引起生物膜脂质过 氧化，细胞内蛋_白和酶变性、DNA损害，最终导致细胞死亡或凋亡。导师高彦彬教授结合络 病理论，认为本病主要病机为肝。肾亏虚，络气虚滞，瘀血阻络，治宜滋补肝肾、益气活血、 化瘀通络，并总结出临床上行之有效的中药复方糖络宁，其疗效在临床和实验研究中已得到 初步证实¨咱1。但是对糖络宁能否通过改善氧化应激，减少坐骨神经细胞凋亡，延缓OPN进 展和相关机制尚不清楚。本研究旨在探讨糖络宁(TLN)对糖尿病大鼠坐骨神经氧化应激及 超微结构的影响。 一、材料与方法 1．实验材料 1．1实验动物 京维通利华实验动物技术有限公司。动物在北京中医药人学SPF级动物实验室分笼饲养，保 持相对湿度在50％～67％，温度在20～22℃，自由饮水，给予维通利华标准人鼠饲料。 1．2实验药物、试剂和仪器 药物和试剂：糖络宁：主药为黄芪、狗脊、生地、丹参，由北京中医药大学东方医院制 剂室制成生药浓度为39／1的浓煎液，灭菌消毒后在冰箱中保存待用，a一硫辛酸购于 EXP Puritan’s 10／12)。链脲佐菌素 Pride公司(100mgX60粒，批号：250597-09 (StreptozotocinSTZ)购于Sigma公司；微量丙二醛(^lDA)测定试剂盒、超氧化物歧化 酶(SOD)测试盒、过氧化氢酶(CAT)测试盒购于南京建成生物工程研究所；大鼠?仁胱天冬 光度计UV-1700，pharmaSpecSHIMADIU；电热恒温水浴锅删．SYlI-NI北京市长风仪器仪 表公司；漩涡混匀器型号：VORTEX一5 15R：酶标仪：ThenIloBioAnalysiSCompany，Multiskan涨3型芬兰；普通光学显微镜日 本OLYMPUS公司；8800型超薄切片机瑞典LKB公司；H-600透射电子显微镜日本日立公司： MOTICAM 2306图像系统中国。 2．实验分组和给药 选用180～2209雄性SD大鼠55只，适应性喂养一周，随机选择12只为正常对照组 (contr01)，余43只大鼠为实验组。实验组大鼠禁食不禁水12h后，予一次性腹腔注射链 成功，造模成功40只，剔除一只后随机分为模型组(model)13只、糖络宁组(TLN)13只、 a硫辛酸组(LA)13只。DM造模成功立即开始灌胃，糖络宁组按生药109／kg·d灌胃；a一 硫辛酸组按20mg／kg·d浠胃；模型组予等量蒸馏水灌胃，实验期间自由饮食，连续给药16 周。 93 首都医科大学中医药研究生论坛(201 3．观察指标 3．1血糖：4周测定一次血糖，各组大鼠禁食8h后断尾取血，用强生稳豪血糖仪测定， 动态观察各组大鼠血糖变化。 3．2坐骨神经姗^含量、SOD、CAT活力、Caspase-3活性测定 港胃16周时，以10％7托合氯醛为麻醉剂，根据大鼠体重，按350mg／kg标准腹腔注射麻 醉，暴露大鼠坐骨神经，迅速取下后，用预冷的生理盐水洗去血渍和杂质．用滤纸吸干后． 迅