冬虫草子实体菌种提纯复壮技术研究.pdfVIP

园艺学 现代农业科技 2011年第 11期 冬虫草子实体菌种提纯复壮技术研究 杨柳平 (梅州农业学校 ，广东梅州 514011) 摘要 从野生冬虫草菌株 中获取菌种，经人工驯化栽培 ，冬虫草 (子实体)在生产实践 中普遍 出现传种几代后菌种严重退化的现象，通 过菌种提 纯复壮前后茵丝生长情况和子实体栽培情况的对比，结果证明不断对菌种进行提纯复壮，使茵种保持原有品种的遗传物质，恢复 原来的生活力和优 良种性，对防止菌种过早退化、保障子实体优质高产有一定的作用。 关键词 冬 虫草子实体；人工栽培；提纯复壮 中图分类号 $567．35 文献标识码 A 文章编号 1007—5739(2011)11-0154—01 2003年开始 ，梅州农业学校进行 “冬虫草 (子实体)人工 丝布满斜面可得到菌种A。②虫体 回接法 。将蛹虫草通过活 栽培技术研究”课题研究并获得成功 ，2004年通过梅州市科 的蛹体进行复壮 ，将所选优良菌株 的分生孢子，挑取一部分 技局组织的成果鉴定，并获2005年度梅州市科技进步三等 放在无菌水内制成孢子悬浊液 ，再选取发育时期的健康蚕蛹 奖。现在校内建立了规模化生产基地 ，取得了较好的经济效 作宿主 ，用75％乙醇消毒 ，用接种针针尖蘸孢子悬浊液刺人 益和社会效益 ，但在生产过程 中 ，遇 到了一个普遍性 的 蛹体 ，感染成功率可在 95％以上 ，将染菌后的蛹体平摊于蚕 难题，就是容易出现菌种老化或衰退 ，造成产量和质量不稳 匾或竹席上 ，24～25℃室温下保护至蛹体僵硬。取长满菌丝 定 【。为了降低这种因菌种退化而带来的风险 ，笔者在菌种 的体内组织粒到斜面培养基上 ，在 24～25℃条件下继续培养 提纯复壮技术上进行 了研究，现将结果总结如下。 到菌丝布满斜面，可得到优良菌种B。③组织分离法。在优 1 材料与方法 良菌株中选取无杂菌的长度 2-4em状态好 的的子实体 ，用 1．1 试验材料 无菌水冲洗 ，刮掉表层 ，取 肉质大小为 1mm于斜面培养基 1．1．1 菌种。经栽培试验不断去劣择优 以获得优良菌株。优 上 ，培养基斜面上应无游离冷凝水 ，以防细菌感染扩散 ，致 良菌株的形态特征：菌丝生长快 、洁白致密 ，后期转浅黄色 ， 使分离失败。在24,-25℃培养 l5d，菌丝布满斜面 ，得到菌种C。 见光后易转桔黄色；在栽培中，选择原基分化早且整齐，子 1．3．3 菌种的去污提纯 。无论采用上述哪种菌种分离法 ，培 实体生长怏、粗壮 、抗杂菌能力强 、耐高温 、孢子多且呈桔黄 养初期必须判断菌丝是否已受杂菌污染 。分离培养后 。若发 色的作为优良菌株，同时作为待复壮 的菌株。 现被有色的霉菌小斑点污染 ，最好放弃 。如 由同一材料分离 I．I．2 培养基配制。培养基 中土豆 200g(煮汁)、蔗糖 20g、 得来的，每支试管都是如此 ，那就要重新分离。若污染点远 磷酸二氢钾 1g、硫酸镁 1g、蛋 白胨 1g、琼脂 2Og，加水定溶 离接种点，多是无菌操作中感染杂菌所致 ，可用前端菌丝切 至 1000mL．经高压灭菌 30min。在24～25℃环境 下制成斜 割法或基 内菌丝挑取法转管提纯 。严格地说 ，在斜面培养基 上的非接种部位若见 白色菌丝 ，则应认为是杂菌菌落 ，就应 面培养基。 1．2 试验设计 立即提纯 ，采用切割法或基内菌丝挑取法提纯后 ，一般都能 获得较好的纯菌丝。 试验设 4个处理 ，分别为：孢子分离培养 (A)；虫体回接