针刺、温针灸、电针对膝骨关节炎模型软骨代谢相关因子影响的实验研究.pdfVIP

织抑制因子（tissue inhibitor of metalloproteinase, TIMPs ）和细胞因子(cell factor) 与关节软骨的降解和骨关节炎的发病密切相关。MMPs 家族有 20 余种，其中 MMP-1 、MMP-3 主要作用底物为Ⅱ型胶原，在骨关节炎患者其表达明显升高， 从而使 MMPs 与 TIMPs 之间失衡，导致关节软骨细胞外基质中 Ⅱ型胶原、蛋白多 糖等过度降解，从而加强软骨的吸收，最终致关节软骨破坏[1-5]。软骨基质的正 常结构和功能也有赖各种细胞因子的调控，其中白细胞介素-1 β （interleukin-1 β， IL-1 β）、肿瘤坏死因子-α （tumor necrosis factor -α，TNF-α）可以引起基质降解 过程中多种酶的产生，包括基质金属蛋白酶家族，抑制 Ⅱ型胶原的合成，引起软 骨基质的破坏，抑制软骨基质的修复，最终也导致关节软骨的破坏，是 KOA 病 理过程中促进软骨基质降解和关节软骨破坏的两种最重要的细胞因子(6-8) 。 针灸作为治疗膝关节骨性关节炎最常见的非手术疗法，临床疗效肯定，近年 来针灸治疗膝骨关节炎的实验研究已有报道[9-11]，但不同针灸方法治疗膝骨关节 炎作用机制的比较研究鲜见报道。本课题欲通过观察单纯针刺、温针灸、电针 3 种针灸方法对实验性膝骨关节炎动物模型软骨代谢相关因子 IL-1β、TNF-α、 MMP-1 、MMP-3 、TIMPs 的影响，分析针灸治疗膝关节骨性关节炎在关节软骨 基质代谢方面的作用机制以及各针灸方法在治疗膝骨关节炎所起作用机理的异 同，为针灸治疗本病的临床应用提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 健康纯种新西兰兔 30 只，雌雄各半，体重 2～2.5Kg ，由浙江中医药大学动 物实验中心提供[SYXK （浙）2003-2004] 。动物在实验环境中适应性饲养 1 周， 一般情况良好开始进行实验。根据随机数字表随机分为正常组、模型组、针刺组、 温针灸组、电针组，每组均 6 只。 1.2 主要试剂 兔白细胞介素 IL-1、肿瘤坏死因子 TNF-、基质金属蛋白酶－1 （MMP-1 ）、 基质金属蛋白酶－3(MMP-3)、TIMP-1 酶联免疫吸附试验（ELISA ）定量检测试 剂盒由杭州昊天科技公司提供，试剂由美国 Rapibio Lab 公司分装。 1.3 动物造模 590 以 ACLT 模型为实验模型，3%戊巴比妥钠 1ml/Kg 耳缘静脉注射麻醉，麻 醉后即予首次肌注青霉素钠每只 40 万 U 预防感染，术野皮肤常规无菌操作，从 膝关节内侧髌骨旁切口进入，切断内侧副韧带及前交叉韧带，术中注意止血，用 青霉素钠生理盐水清理伤口，逐层缝合后放入笼中单独饲养。术后 5 天 40 万 U 青霉素钠肌注预防感染。 1.4 各组处理方法 造模完成一周后开始对各治疗组患侧膝关节进行针刺治疗，穴取“犊鼻” 、 “后三里”，隔日治疗一次，十次为一个疗程，连续二个疗程，疗程间隔 5 天。 针刺组单纯针刺 20 分钟；电针组采用 2/100Hz 疏密波，强度 1～2mA ，以新西 兰兔下肢微微抖动为度，每次电针 20 分钟；温针灸组针刺后将 1cm 长度艾条 置于针柄上点燃，二炷后起针。模型组造模完成后不作针刺处理，同步饲养。 正常组不造模、不针刺，同步饲养。 1.5 标本采集及指标测定 治疗结束后第 2 天各组实验动物于兔架上固定行耳缘静脉采血 10mL，静置 3 小时后离心 10 min，取上清液置于-20℃低温冰箱中保存待检测。采用 ELISA 法测定血清中 IL-1、TNF-、MMP-1 、MMP-3 、TIMPs 的浓度，操作按试剂盒 说明书进行。 1.6 统计学方法 x 采用 SPSS17.0 统计软件进行处理，数据以均数±标准差（ ±S ）表示，组间 比较运用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD 检验， P ＜0.05 为差异有统 计学意义。 2 实验结果 与正常组比较，模型组 IL-1β、TNF-α、MMP-1 浓度显著升高(P ﹤0.05) ， MMP-3 浓度显著