针刺对脑出血大鼠HIF-1α及其靶基因的影响.pdfVIP

的表达。结果：模型组 HIF-1α 蛋白的表达较 WKY 对照组和假手术组增高 P0.05 ），VEGF mRNA 、EPO mRNA 的变化趋势与HIF-1α接近。针刺组大 （ 鼠 HIF-1α、VEGF mRNA 和 EPO mRNA 含量于术后 3 天、7 天上调明显， 与相应时间点模型组比较差异有统计学意义（P0.05 ）。结论：针刺可能通过 上调 HIF-1 及其靶基因 VEGF 、EPO 的表达来加强机体对脑缺氧的有效应答从而 减轻脑损伤。 [关键词] 脑出血；针刺；缺氧应答；缺氧诱导因子；靶基因；血管内皮生长因 子；促红细胞生成素 脑出血后血肿周围组织缺血缺氧是脑神经元损伤的关键病理环节。缺氧诱导 因子-1 （Hypoxia inducible factor-1, HIF-1 ）是介导机体缺氧应答反应的主要转录 因子。HIF-1 可通过调控其下游靶基因如血管生长因子（vascular endothelial growth factor , VEGF ）、促红细胞生成素（erythropoietin，EPO ）等来适应机体 的缺氧环境。我们的临床与实验研究均已证实电针水沟等穴对脑出血具有良好的 疗效[1-3]，但其具体作用机制还未完全阐明。本研究通过观察针刺水沟穴对HIF-1 及其靶基因 VEGF 、EPO 在高血压性脑出血模型大鼠脑出血后脑组织中表达的影 响，进而从脑缺氧应答的角度阐释针刺治疗高血压性脑出血的作用机制。 1 材料与方法 1.1 实验动物及分组 自发性高血压大鼠（spontaneous hypertensive rat, SHR ）、 京都 Wistar 大鼠（Wistar-Kyoto rat, WKY ）雄性，250~300 g ，SPF 级，由上海斯 莱克实验动物有限责任公司提供。所有动物购回后适应性喂养一周，无不良反应， 饮食、饮水正常者，即纳入实验。于造模成功后随机纳入 WKY 对照组、假手术 组、脑出血模型 1d 组、脑出血模型 3d 组、脑出血模型 7d 组、针刺 1d 组、针 刺 3d 组、针刺 7d 组，每组 6 只。 1.2 模型制备 参照胶原酶加肝素脑内尾状核联合注射的方法制备脑出血模型 [4] 。 1.3 各组处理措施 模型组于造模成功后按时间点取材。针刺组于造模成功后， 参照华氏等制定的《实验动物穴位图谱》选取水沟穴（水沟：唇裂鼻尖下 1mm 正中处，向上斜刺 1mm）。水沟穴与右耳根部皮肤接 G6805- Ⅱ针刺治疗仪，连 续波，频率 120 次/ min ，强度 1mA，留针 30min 。即时治疗 1 次，此后每日治 274 疗 1 次。并分别于造模成功后按时间点取材。WKY 对照组、假手术组：造模方 法除注入尾状核液体为生理盐水外，余步骤同模型组。并于造模成功后 6h 取材。 1.4 指标检测 HIF-1α蛋白表达的检测，Western blot 法。HIF-1α抗体（1:1000）， β-actin （1:5000）。VEGF mRNA 、EPO mRNA 的检测，荧光实时定量RT-PCR 法。 VEGF mRNA 上游引物 5- GCAGTGCTCCCCATCCGCTG-3 ，下游引物 5- TGCTCGTCCGACAGCTGG GA -3 。 EPO mRNA 上 游 引 物 5’-CTTGCTACAGATTCCTCTG-3’，下游引物 5’-TGTTCTTCCACCTTCATTC-3’ 。 1.5 统计学处理 各组数据用均数±标准差（x s ）表示，运用 SPSS15.0 统计软 件进行统计学分析，各组数据比较采用 One-Way ANOVA、q 检验。 2 结果 2.1 各组大鼠脑组织中 HIF-1α蛋白的表达 由图 1 可见：对照组和假手术组大鼠脑内仅见微量 HIF-1α蛋白表达。模型 组大鼠血肿周围脑组织中 HIF-1α 蛋白表达增加，与对照组和假手术组相比差异 有统计学意义（P0.05 ），且术后 3~7 天均处于高表达水平；电针组大鼠血肿周 围脑组织中HIF-1α蛋白表达进一步上调，且 3 天和 7 天时与相应时间点模型组 比较差异有统计学意义（P0.05 ）。