针刺预处理对缺血再灌注高脂血症大鼠心肌SERCA+mRNA表达的影响.pdfVIP

表 1 特异性引物序列 引物名称 引物序列 SERCA 5- AAGGAGTTCATCCGCTACCT- 3 5-AGACCATCCGTCACCAGATT -3 β-actin 5-GCAGTTGGTTGGAGCAA-3 5-ATGCCGTGGATACTTGGA-3 注：β-actin 为内参 1.2 实验动物及分组 将高脂血症 SD 大鼠 24 只，随机分成 4 组，每组 6 只。假手术组：暴露心 脏 80min，不做其他处置；IR 组：缺血 20min ，再灌注40min ；IP 组：缺血 5min 再灌注 5min，反复 2 次，然后缺血 20min ，再灌注 40min ；AP 组：采用平补平 泻手法针刺双侧内关及膻中穴，每天一次，每次 20min ，共 7 天。其中假手术组、 IR 组及 IP 组，前 7 天对大鼠进行抓取捆绑固定，每天 1 次，每次 20min 。 1.3 动物模型的制备、取材及总 RNA 的提取 模型制备：10%水合氯醛（0.4ml/100g ）腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台， 连接心电图电极。除毛，沿颈部正中剪一长约 2.5cm 的小口，气管插管，连接呼 吸机，按 1-1.5ml/100g 潮气量，70-80 次/分频率维持正压呼吸。呼：吸=2 ：1。 沿胸骨左缘约 0.5cm 处剪断第 3、4 肋骨，用线牵拉两侧剪断的肋骨，暴露胸腔。 采用推管法行左冠状动脉缺血再灌注。以左室前壁发绀并向外膨胀、心电 S-T 段 改变为缺血标志。 1.4 RT-PCR 反应及产物测定 实验结束，取大鼠左心室尖部组织，大约 100mg，DEPC-H O 冲洗干净，用 2 TRIzol 法提取总 RNA 。取 2uL 稀释 100 倍后在紫外分光光度仪上测定其 OD260/OD280 比值，该值在所有样品中均应在 1.80~2.0 之间。总 RNA ，经 0.8% 琼脂糖凝胶电泳鉴定，可清晰见到 18S 和 28S 两条 rRNA 条带，说明所提取的 RNA 无明显降解，是完整的。反应条件均为：65℃（1min）→30℃（5min ）→65℃ 25min ）→98℃（5min ）→5℃（5min ）从 30℃升温到 65℃时，必须 15min-30min （ 内匀速升温。 1.5 统计学处理 464 实验数据 CT 值应用 REST2008 及 SPSS16.0 统计软件处理，采用均数±标准 差（x ±s ）表示。各组组间差异采用单因素方差分析（One-way ANOVA ），组间 比较用LSD 及 S-N-K 分析；以 P ﹤0.05 为显著性，P ﹤0.01 为极显著性的标准。 2 结果 针刺预处理对心肌缺血再灌注损伤高脂血症大鼠心肌组织中 SERCAmRNA 表达的影响见表 2 、图 1、2 、3 。 表 2 针刺预处理对缺血再灌注损伤高脂血症大鼠心肌组织中 SERCAmRNA 表达的影响 （ ±s ） x 组别 例数 结果 假手术组 6 0.111±0.0006# IR 组 6 0.002±0.001*# IP 组 6 0.017±0.002*# AP 组 6