针刺对2型糖尿病胰岛β细胞胰岛素表达的观察.pdfVIP

1.1 实验动物与造模 （1）实验动物：刚断乳 SD 雄性大鼠 100 只，体重 60 －100g，由上海斯莱克实 验动物有限责任公司、中国科学院上海实验动物中心提供。 （2 ）造模方法：将刚断乳 SD 雄性大鼠（100 只）随机分为 2 组，一组 20 只， 用普通饲料喂养，简称普食组；另一组 80 只，用高脂饲料喂养 12 周，造成单纯 性肥胖大鼠模型，肥胖大鼠造模成功后，挑选糖耐量异常的大鼠，以 30mg/kg 腹腔注射链脲佐菌素（STZ ）（由上海前尘生物科技有限公司提供，美国Sigma 公司产品），高脂饲料继续喂养 8 周，测空腹血糖高于 7.0mmol/L 为 2 型糖尿病 动物模型。 （3 ）实验分组：将造模成功的大鼠按随机化原则分为针刺治疗组 （简称针刺组）、 西药对照组（简称西药组）、安慰剂组，同时将普食组大鼠作为正常对照组（简 称正常组），每组各 10 只。 1.2 治疗方法 治疗方法：将针刺组大鼠放入固定器中，用酒精消毒一侧“后三里” （相当 于足三里）、内庭和胰俞穴，取 32 号 1 寸毫针，分别刺入 5mm、3mm 和 8mm 深度，然后于下肢两穴接通 G6805-Ⅲ电针治疗仪，采用频率 10Hz，强度 0.5V 的连续波，胰俞穴每隔 5min 提插捻转 1 次，连续治疗 4 周，左右侧轮换取穴。 西药组用罗格列酮灌胃 0.2mg/kg 体重，1 次/d ，连续4 周；安慰剂组用生理 盐水灌胃 2ml/kg 体重，1 次/d ，连续4 周。 记录造模前及造模后平均每天的饮水量及摄食量，并进行比较。 1.3 样本采集 各组大鼠于实验结束后，禁食 12 小时，10％乌拉坦（氨基甲酸乙酯）1g ／ kg 腹腔注射麻醉后，摘眼球采血备用；迅速切开腹腔，分离胰腺，置入 4%多聚 甲醛中备用。 1.4 观察指标与方法 胰岛 β细胞形态学及胰岛素表达的观察：实验结束后，断头处死，分离胰腺， 石蜡包埋、酒精脱水及胰岛素（Ins ）免疫组化染色后，在光镜下观察胰岛形态 及胰岛 β细胞胰岛素表达。 血糖测定采用葡萄糖氧化酶法。 647 1.5 统计分析 0.8 n 0.7 o Normal