转基因作物LAMP快速检测技术建立与应用.pdfVIP

北京国％籽种产业发展高峰论坛论疋集 图一 、 n B DNAmⅡk日-2-Btl7fi：3．MON810．4：#}6々．5：1T51-1-6：m，A：c删35s月自fNOS镕t7 目1LAMP特#*植驯分斩 22 LAMP挂木是敏性分析 未显示)，完成LAMP扩增和电泳时问约2h，与荧光 5％、 将提取的Btl76品系DNA稀释成1％、O定量PCR基本相当，而检测试剂费用仅为荧光定量 01％、002％、001％、0005％6个梯度。采用LAMP拄 术，常规定性PCR技求和荧光定茸PCR技术对 与荧光定量的相比，仅有1个样品检铡结果不正确 CaMV35S蚰动子进行扩增，检测3种方法的灵敏度。 (假阳性)，町能是配置PCR体系过程中操作不当造 结果显示，LAMP技术的是敏度达到001％，比常规定 成．随后对该样品进行多次重复检测。结果显示都为阴 性PCR要高10倍左右，与荧光定量PCR相近(罔2)。 性。从以上的分析可以看出，LAMP技术具有很好的 2．3LAMP技术实际幢剥应用评价 实用性，操作小仅简单、快速，经济。而且检测结果的准 为评价LAMP检删的准确性，利用LAMP技术和确率很高(高于95％)．可以用于大量样品的转基因成 荧光定量PCR技术间时对50个样品进行检测(结果分的初筛。 搿 ㈣蒜 n ( 1：DNAma^…2…bt763 05％bt]764-01％h176．5：002％btl76．6．001％h176+7：0005％btl76． 8 m，ALAMP=B*M≈hPCR：C：*m2iFCR 围2LAMP拄$是敏廑分析(c洲v35s启动子基目) 3结论 进行转基因成分检测．并对其实用性进行了探讨。结 目前，标准的转基阿检测方法费时、费力、对人员 果显示与常规PCR技术相比．LAMP具有报强的特 素质要求高，H适合专业检Ⅲ0机构使用。开发快速、准 点．高效，快速，价格低廉，对实验条件要求简单，不需 确、低成本的检测技术足转基陶检测T作中业待攻克 要PCR仪等昂贵设备，适台基层检冽机构、种了企业 的难题。笔者采用高灵敏度、高特异性的LAMP技术以及育种者使用。『目时，作为标准方i土有效补充．号业 中圄崔学通报htlp：／／www．casb．org．∞ Chinese ScienceBulletin ·177· Agricultural amplifica-tion ofClinical 检测机构可以利用LAMP技术对大量样品进行初筛， methodiC]．Journal 1-955． 对于阳性的样品再通过常规方法进行验证，这样