马铃薯X病毒外壳蛋白基因的克隆与系统进化分析.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2014，42(27)：9283—9285，9420 责任编辑 李占东 责任校对 李岩 马铃薯 X病毒外壳蛋 白基因的克隆与系统进化分析 黄永会 ，朱英 ，刘永翔 ’ (1．贵州省生物技术研究所，贵州贵阳550006；2．贵州省农业生物技术重点实验室，贵州贵阳550006) 摘要 从贵州威宁等地采集马铃薯病叶样本，采用试管捕捉反转录 PCR(tube--capture—RT一．PCR，TC—RT—PCR)的方法克隆出714bp的 PVXCP基因，编码237个氨基酸残基。系统进化分析表明，PVXCP基因可分为两大类群，推测分离物属于x株系，并建议重型花叶也 可作为PVX病叶样本。 关键词 马铃薯x病毒；外壳蛋白；基因克隆；进化分析 中国分类号 S188 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2014)27—09283一o3 aOni】IIgandPhylogeneficAnalysisofPotatoVirusX CPGene IIUANG Yong-hui ，ZHUYing ，LIUYongx·iang (1．GuizhouInstituteofBiotechnology，Guiyang，Guizhou550006；2．GuizhouKey LabforA culturalBioteehnology．Guiyang，Guizhion550006) Abstract Potatole：ayeswiithPVX infectionsymptomswerecollectedfrom Gui[zhouProvinceincludingWeiningCounty．A PVX cP geneof 714bpencoding237aminoacidresiduesWaSclonedwiththetubecaptureRT—PCR (TC—RTP·CR)method．Phylogenicanalysisreveal~}dtl】tat PVX CPgenescallbe dividedintotwogroups．nadhteisolatewasestimatedtobeX strain．Furthermore，Wesuggestedthatseveremosaicleav- e8couldalsobesamplesforPVX genecloning． Keywords PotatovirusX (PVX)；Coatprotein(cP)；Genecloning；Phylogenetieanalysis 马铃薯 x病毒(PotatovirusX，PVX)是Potexvirus属病 箱中。阴性对照无毒苗由贵州省马铃薯工程中心提供。 毒，在全世界马铃薯种植区域都有发生，通常造成 15％的减 1．1．2 主要试剂与菌株。M．MLV反转录酶、RNase抑制剂、 产，而与其他病毒复合侵染则会造成致命损害。根据栽培马 酶、T4DNA连接酶和pMD18．T质粒购 自大连宝生物公 铃薯对植物抗病基因Nb、Nx和 Rx的不同反应，PVX通常可 司，DTF溶液和琼脂糖购 自上海生工生物工程有限公司， 以划分为x 、x、X 和 x4个株系。X。株系在 Nb或Nx存 X．gal和 IPTG购 自MBI公司，胶 回收试剂盒和 DNAMarker 在时引起超敏反应，x 株系只在Nb存在时引起超敏反应， 购 自Tiangen公司，所有化学试剂均为国产分析纯。大肠杆 x 株系只在 Nx存在时引起超敏反应 ，x 株系在 Nb和 Nx 菌DH5a由贵州省农业生物技术重点实验室保存。 存在时均无反应 ，但不能侵染携带 Rx基因的植株 。 1．2 方法 PVX基因组有5个开放阅读框，外壳蛋 白由ORF5编 1．2．1 引物设计。参照Genbank中已登录的PVXCP基因 码，其主要功能定义为在病毒结构中为病毒基因核苷酸提供 序列，利用Primerpremier5．0设计合成扩增PVXCP基因的 包被，保护了病毒基因组信息流失。外壳蛋白在病毒感染植 一 对 引物 (PVXf：5-GAATGTCAGCACCAGCTAGCAC-3和 株的传播中具有重要作用，包括长距离微管运输和细胞间的