三氯乙烯经水暴露对BALB%2fc小鼠Th17细胞的影响.pdfVIP

有机溶剂三氯乙烯（TCE）在工业上 公司），Universal 320R型台式低温高速离 被五金和电子等行业广泛用作金属部件和 心机，BioTek-ELx 800酶标仪。 电子元件的清洗剂。随着工业的迅速发展， 1.2 实验动物处理 6周龄雌性BALB/c TCE的使用量逐年上升，并已成为重要的 小鼠，购自北京维通利华实验动物有限责 [1, 2] 职业毒物和环境污染物 。越来越多的研 任公司，自由进食，维持12 h光照/黑暗的 究表明，TCE的暴露与包括自身免疫在内 昼夜节律，处理前适应性饲养1周。随机分 [3] 的免疫相关效应有关 ，但TCE暴露引起 为空白对照组、溶剂对照组和2.5 mg/ml 的免疫性损伤机制还有待进一步研究。 TCE染毒组和5.0 mg/ml TCE染毒组；TCE Th17是近年新发现的特异性表达维甲酸 用1%DMSO溶解，经饮水摄入，为了保持 相关孤儿核受体(ROR)?t 的CD4+T细胞亚 饮水中TCE 的浓度，每2-3天换水1次并记 群，在自身免疫应答中介导炎症反应和机 录小鼠饮水量，动物每周称体重1次，在2 、 [4] 体损伤 。本研究通过检测经水摄入TCE 4 、8和12周眼球摘除法采集外周血，处死 的BALB/c小鼠体内Th17细胞数量、特异性 动物无菌取脾脏。 转录因子ROR?t mRNA表达水平及其分泌 的细胞因子IL- 17含量，探讨TCE暴露对体 1.3 流式细胞仪（FCM ）检测脾脏Th-17 内Th17细胞的影响，为最终阐明TCE的危 细胞占CD4+ T细胞比例 取脾脏组织 害及其发生分子机制，并制定防治对策提 约300 mg, 用小弯剪在200 目不锈钢筛网 供依据。 上将其剪碎，PBS冲洗，制成单细胞悬液； 台盼蓝染色活细胞计数，细胞活力95% 以 1材料和方法 上; 用含10%FBS 的1640培养液调整细胞 1.1 主要试剂和仪器 TCE （99.5%分析 7 密度为8×10 cells/L后分装于EP 管。取取 纯级）和二甲亚砜（DMSO ）为Sigma公司 6 10 个脾细胞（200 µL），接种于24孔培养 产品，RPMI 1640培养基为Gibco 公司产 板，加入佛波醇乙酯(PMA，50 g/L)，离 品，小牛血清（FBS ）为杭州四季青生物 子霉素（Ionomycin, 500 g/mL ）和蛋白转 工程材料有限公司产品，IL- 17酶联免疫吸 运抑制剂莫能菌素（BFA，200 mol/L ）， 附测定（ELISA）试剂盒为美国RB公司产 在37 ℃、5%的CO 环境下培养4 h进行体 2 品（上海西唐生物科技有限公司进口分 外激活，4 h后将每孔所收集细胞装于