聚酰胺层析柱分离纯化独一味中总黄酮实验研究.pdfVIP

聚酰胺层析柱分离纯化独一味中总黄酮的实验研究 李茂星 贾正平﹡ 张汝学 葛欣 兰州军区兰州总医院药材科,甘肃 兰州 730050; [摘要] 目的 考察聚酰胺分离纯化独一味总黄酮的最佳工艺 方法 采用聚酰胺柱吸附,水及不同浓度 乙醇溶液洗脱, 比色法检测各洗脱液中的总黄酮含量 结果 聚酰胺能很好地吸附独一味中的总黄酮, 独 一味中的总黄酮主要集中在 30%及 70% 的乙醇水溶液洗脱部位 总黄酮得率分别为 68.54%和 23.19% 两部位的总黄酮含量分别为 74.45% 43.65% 直接用 70%乙醇洗脱则总黄酮得率为 89.56%,洗脱物中总 黄酮含量为 57.62% 聚酰胺柱在适当处理后可重复利用 但随着重复利用次数的增加 聚酰胺对黄酮的 吸附力不断下降 结论 聚酰胺吸附 乙醇水溶液洗脱能分离得到较纯的独一味总黄酮 且工艺简便易 行 得率高 适合工业化生产 [关键词] 独一味 总黄酮 聚酰胺柱 分离纯化 独一味为唇形科独一味属植物独一味[Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo]的全草或根 该属一属仅一 种 又名独步通[1] 藏语称 大巴 打布巴 是我国藏 蒙 纳西等民族民间常用药之一 其味苦 微寒 有小毒 入口久则有麻痹感 具有止血 镇痛消肿 活血化瘀 补髓 行气 续筋接骨之功效 晶珠本草 记载 固精髓 引流黄 水 青藏高原药物图鉴 记载 补髓 止血 治浮肿后流黄水 关节积黄水 骨松质发炎 2000版 中国药典 [2]收载独一味胶囊 临床应用广泛[3] 主要用于各种 外科手术后的镇痛止血及牙科 妇科 关节炎等方面 独一味主要含黄酮类 环烯醚萜类 三萜皂甙类 等成分 中国药典 检测了其中的总黄酮含量 但有关总黄酮的提取与分离未见报道 聚酰胺对各种黄 酮类化合物具有较好的吸附 分离效果 且容量大 近年来广泛用于天然产物的分离[4-5] 我们利用聚酰 胺柱吸附,水及不同浓度乙醇溶液洗脱的方法,分离提取独一味中的总黄酮(total flavones TF) 为充 分开发利用这一资源 打下坚实的基础 1 材料与仪器 独一味 2003 年 8 月购自甘肃省玛曲县药材公司 经兰州医学院药学系赵汝能教授鉴定为独一味 [Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo] 芦丁标准品 ( 中国生物制品检定所) HP 8453 二级管阵列紫外可见 分光光度计(美国惠普公司) BP210S 电子分析天平(赛多利斯有限公司) LGJ-冷冻干燥机 (军事医学科 学院实验仪器厂) 所有化学试剂均为分析纯 2 含量测定 *通讯作者 贾正平,Tel(0931-8975460) 2.1 芦丁对照品贮备液 精密称取芦丁标准品 20.2mg 置 100ml 容量瓶中 加 70%乙醇制成浓度为 0.202 mg/ml 的对照品溶 液 摇匀 备用 2.2 标准曲线的绘制[2] 分别精密吸取芦丁对照品溶液 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 ml 置 25 ml 容量瓶中 加水至 6 ml 加 5%亚硝酸钠溶液 1 ml 摇匀 放置 6 分钟 加 10%硝酸铝溶液 1 ml,摇匀 放置 6 分钟 加氢氧化钠试 液 10 ml, 再加水至刻度 摇匀 放置 15 分钟 在 500 nm 波长处测定吸收度 以浓度(C)与吸收度(A) 进行直线回归 得回归方程为 A=0.01094C+0.000696 =1.000 在 0~48.0 g/ml 范围内呈线性关系 2.3 样品测定 将样品配制定容成一定浓度的 70%乙醇溶液 摇匀 按 2.2 项下操作 测定其中的总