硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞迁移能力影响的相关性研究.pdfVIP

IIIl!!i医科人学硕．L学位论文 硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞迁移能力影响的相关性研究 摘要 目 的 多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞克隆性增生的恶性肿瘤，是一种低增殖性、低凋亡活性 的分子克隆疾病。侵袭和转移是恶性肿瘤的重要特征。而肿瘤细胞的迁移是其侵袭转移的 基础。 细胞迁移(cellmigration)指的是细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的浓度 梯度后而产生的移动。在此过程中细胞不断重复着向前方伸出突足，然后牵拉胞体向前移 动。细胞骨架和其结合蛋白是这一过程的物质基础，另外还有多种物质对之进行精密调节。 HSP90为生物进化过程中一种高度保守的胞浆蛋白质。HSP90被抑制后可以抑制肿瘤 细胞的血管生成和移动；并且能抑制HGF／S刚ET信号通路，使细胞的运动能力和侵袭能力 Q和HSP90 减弱。已有研究证明，HSP90抑制剂可以诱导删细胞的调亡。HSP90有HSP90 B两种类型。HSP90Q可通过调节细胞周期促进细胞增殖，HSP90B能够抑制细胞凋亡与分 化。 硼替佐米是治疗复发或难治的删的最有前途的新药。其诱导的细胞凋亡与很多事件 料表明，在恶性肿瘤细胞中HSP90过度表达，并且以HsP90Q的表达增高为主。本实验以 人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞为研究对象，探讨了经硼替佐米作用后的瑚细胞中热休 能力的变化，分析了HSP90与人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞迁移能力的相关性。从而 为进一步开发新药及指导临床治疗提供理论基础。 方 法 1．细胞培养 冻存的MM细胞经过复苏后，置于含10％的胎牛血清的I冲MI1640培养 液中，于37℃、5％C02和95％空气湿度条件下进行培养，在细胞生长至对数生长期时收 集备用。 u 2．侵袭实验 侵袭实验用24孔趋化板，其孔径为8m。U266细胞在含10％的胎牛血 清的RPMI 200彻∞l／L浓度硼替佐米的培养液，置培养箱37℃，孵育4h后收集下室悬液中的细胞， 用细胞记数板在倒置显微镜下进行细胞记数。 3．RT-PCR 分别检测经硼替佐米作用和不经其作用前后，体外MM细胞中HSP90Q和 HSP90 B的表达水平。 4．统计学处理 数据均用SPSS13．O统计软件包处理，计量资料统计描述用爻±J表示； 多组资料之间的比较采用单因素方差分析；组间两两比较采用SNK法；HSP90a和HSP90 I!!i医科人学硕l：学位论文 B的表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力的关系采用相关分析。所有分析结果均以P0．05 为有统计学意义。 馇 田 ：日 术 通过上述研究方法，我们发现 l-人多发性骨髓瘤细胞株中HSP90mRNA的表达情况 随着硼替佐米浓度的增加，其MM细胞中HSP90Q的mRNA表达量逐渐增加。由低 浓度组到高浓度组所对应的HSP90 HSP90 应的HSP90 B的灰度值有差别(P0．05)。虽然从图上看HSP90B的删[矾A表达量增加趋 势不很明显，但总体上仍具有统计学意义(PO．05．)。 2．硼替佐米对人多发性骨髓瘤细胞迁移能力的影响 U266细胞在趋化因子的作用下由上室迁移至下室，但因为下室中硼替佐米的药物浓度 不同，因此最终进入下室的细胞数不同。随着药物浓度的增加，进入下室的U266细胞数 法对各个不同浓度组所对应的细胞迁移数进行两两比较，得出下述结果，0nmol／L组与100、 硼替佐米药物浓度的增加，其U266细胞迁移数逐渐减少(P0．05)。 3．HSP90Q和HSP90 B表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力的相关性分析。 随着硼替佐米药物浓度的逐渐增加其细胞迁移能力呈下降趋势，但其细胞内的HSP90 的表达呈逐渐上调趋势，并且以HSP90 的表达与人多发性骨髓瘤细胞迁移能力呈负相关(HSP90 B的r值为．0．591，P0．05)。 结 论