《马尾松钙调素基因的克隆及响应松材线虫侵染的表达特征-论文》.pdfVIP

林业科学研 究 2014，27(3)：323～ 328 ForestResearch 文章编号：1001-1498(2014)03-0323-06 马尾松钙调素基 因的克隆及响应松材 线虫侵染的表达特征 徐 亮 ，刘振宇 ，吕 全 ，梁 军 ，张星耀 (1．北京林业大学林学院，北京 100083；2．中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所，北京 100091 3．山东农业大学植物保护学院，山东 泰安 271018) 摘要：松材线虫病是由松材线虫(Bursaphelenchusxylophilus)侵染引起的严重病害 ，引起重大的经济和生态损失。钙 调素 (CaM)是真核生物中ca“主要传导蛋白，本研究采用 RT．PCR方法 ，首次从马尾松中克隆获得 CaM，命名为 pmCaM，并检测了其响应松材线虫侵染的表达特征。序列分析表明：pmCaM 完整的开放阅读框核苷酸序列为450 bp，编码 149个氨基酸的蛋白质 ；该蛋白含有4个 EF．hand结构域 ，具有钙调素的典型特征 ，与其它植物的CaM蛋白 均有较高同源性。实时荧光定量 PCR分析显示：接种松材线虫后30～ 180min时间段 ，马尾松苗根 、茎、叶器官中 的pmCaM均下调表达，但不同器官间显著下调表达的时间点存在差异；同时，不同器官pmCaM表达量变化均存在 特异的随时间发展的波动特征，其中发现，根茎pmCaM在松材线虫接种45min时均处于表达量高峰。本研究结果 显示pmCaM表达响应了松材线虫侵染 ，揭示pmCaM可能参与了调控松材线虫一马尾松互作早期的钙信号响应。 关键词：松材线虫病 ；马尾松 ；松材线虫 ；pmCaM；克隆表达 中图分类号：$791．248 文献标识码 ：A CloningandExpressionCharacteristicsofPinusmassonianapmCaM ResponsetoBursaphelenchusxylophilusInfection XULiang ， Zhen—yu ，LUQuan，LIANGJun，ZHANGXing．yao (1．CollegeofForestry，BeijingForestryUniversity，Beijing 100083，China；2．ResearchInstituteofForestEcology EnvironmentandProtection，ChineseAcademyofForestry，Beijing 100091，China；3．CollegeofPlantProtection， ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an 271018，Shandong，China) Abstract：Pinewiltdisease(PWD)causedbythepinewoodnematode(PwN)，Bursaphelenchusxylophilus，is believedtobethemostdestructivediseaseofpinespecies，causingsignificanteconomicandecologicallossesaround theworld．Calmodulin (CaM)isamajorcalcium-bindingmessengerproteinexpressedinalleukaryoticcells．A cDNAsequenceofCaMwasclonedfromMassonpine(P．massoniana)byreversetranscriptionpolymerasechain reaction(RT—PCR)methods，andnamedaspmCaM．AndthepmCaM expressioncharacteristicsresponsetopine woodnematodeinfectionwascheckedbyreal—timefluorescentquantitativePCR．Thesequence