马氏珠母贝IKKε同源基因的克隆及表达分析.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2014年，第 33卷，第 2期，第 266272页 GenomicsandAppliedBiology，2014，Vo1．33，No．2，266—272 研究报告 ResearchReport 马氏珠母贝IKKe同源基因的克隆及表达分析 焦钰 杜晓东 王庆恒 黄荣莲 邓岳文 广东海洋大学水产学院，湛江，524025 通讯作者，gdhddxd@hotmail．tom 摘 要 IKK￡(inhibitorofNF-KBkinases8)是NF—KB (nucleurfactorI(B)信号通路中的关键成员，参与调控 细胞的分化、发育、凋亡及免疫反应。本研究根据马氏珠母贝转录组数据库中注释为 IKKe的unigene序列设 计引物，应用 cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆获得 了马氏珠母贝(Pinctadamartensii)IKKe基因cDNA 的全长序~(PmIKKe)并对其序列特征进行分析；同时利用荧光定量 PCR(Peal—timePCR)技术检测了马氏珠 母贝六个组织中PmlKKs基因mRNA 的表达。结果表明：PmlKKs基因cDNA全长2843bp，其中5’UTR为 116bp，3·UTR为 516bp，含有 27bppolyA，开放 阅读框为 2211bp，编码 737个氨基酸残基 。预测其分子量 为 85．07kD，等 电点为 6．17。多序列比对显示 PmIKK8与其它物种 IKKs有较高的同源性，与牡蛎的序列相 似性有 45％。软件分析结果显示 PmlKKe的N端含有一个蛋 白激酶功能结构域和一个 MAPKK (mito． gen—activatedproteinkinasekinase)的激活位点，C端含有一个亮氨酸拉链(1eucinzipper，L 和一个螺旋一环 一 螺旋结构(helix—loop．helix，HLI-I)。荧光定量 PCR分析表明PmIKKe在马氏珠母贝肝胰脏、性腺、血淋 巴、鳃、 外套膜、闭壳肌六个组织中均有表达，肝胰脏中表达量最高。本研究为进一步阐述PmlKKe在马氏珠母贝生 长、发育及先天性免疫中的作用提供理论基础。 关键词 IKKe，Pinctadamartensii，基因克隆，荧光定量 PCR M olecularCharacterization and Expression AnalysisofPmlKKe cDNA from Pinctadamartensi JiaoYu DuXiaodong WangQingheng HuangRonglian DengYuewen FisheriesCollege，GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang，524025 Correspondingauthor，gdhddxd@hotmail．tom DOI：10．13417／j．gab．033．000266 Abstract IKKe(inhibitorofNF—KBkinases8)isanimportantcomponentintheNF—KB(nucleurfactorKB)sig— nalpathwayandplayscrucialrolesin thedifferentiation，development，apoptosisnadimmuneresponse．In this study,basedontheunigenesequenceannotatedasIKKe inthetrna scriptomedatabaseofPinctadamartensii，using rapidamplificationofcDNA endstechnology,thefulllengthofIKI~ geneⅥ瑁Sobtainedfrom Pinctadamartensii (PmIKK~)．TheobtainedfulllengthofPmIKKecDNAwas2843bp，containinga5’untranslatedregion0-JTR)of 116bpnada3’UTRof516bpwith27bppolyAtail．Theopenreadingframe(ORF)was2211bpencoding737 aminoacidresidues．Thepredictedmolecularweightwas85．07kD．isoelectricpointwas6．17．Multiplesequence alignmentindicatedthatⅡ swashihglyconservativeamongspeciesandPmIKKehad45