γ-GCS-GS(谷胱甘肽合成酶)在原核和真核细胞中的表达和重金属耐受性研究.pdfVIP

摘要 摘要 谷脱甘肽(GSH)是普遍存在于植物、动物和其它生物体内的活性三肽。分子结构 中的活性巯基具有重要的生物学功能，使其能络合金属离子，降低重金属对细胞的毒害。 且其作为一种抗氧化剂，能够清除重金属毒性产生的活性氧自由基。所以，提高GSH的 含量能够提高生物体对重金属的耐受性。GSH是由谷氨酰半胱氨酸合成酶(丫一GCS)和 细胞内GSH含量维持在一定水平。根据文献报道，在某些革兰氏阳性菌中存在一种具有 制。所以该酶的表达能够使细胞合成大量的GSH。 点为4．90，平均疏水值为．0．268。该蛋白含有一个ATP结合位点，且具有Glu cys．!igaSe L 和CPSase 液链球菌(Streptococcussalivarius)、血链球菌(Streptococcus (Streptococcus 析表明它们的亲缘关系也相对较近。蛋白质三维结构预测表明它们的1,-GCS．GS具有相 似的空间构架，推测其行使相似的功能。 为了研究StGCS．GS基因在原核系统中的表达情况及其在重金属胁迫下的抗性功能， 核层析柱纯化后获得了高纯度的融合蛋白。经Westernblot检测，纯化后的蛋白为 测试。结果发现，在lmM CdCl2、2mMNiS04胁迫条件下，转化大肠杆菌的生长状态明 够提高大肠杆菌对cd、Ni的抗性，在其逆境胁迫下的生长发挥重要作用。 为了进一步研究StGCS—GS基因是否赋予转基因酵母在不同非生物胁迫下的抗性功 上，并转化到酿酒酵母(Saccharomyces 蛋白进行了表达定位研究，结果表明融合蛋白定位于酵母的细胞质中。 为了进一步研究StGCS．GS基因的表达是否能提高高等植物的在重金属胁迫下的耐 摘要 属胁迫耐受性分析。通过对野生型和转基因烟草在Cd、Ni、cIl胁迫后的根长、鲜重及 叶绿素的统计分析表明，在不同浓度的Cd2+和Ni2+胁迫下，转基因烟草的生长状态都要 优于野生型。但在Cu2+胁迫下，转基因烟草并未表现比野生型更好的耐受性。说明 融合蛋白在拟南芥悬浮细胞中的表达定位研究表明该蛋白能够在细胞中表达。 关键词嗜热链球菌；StGCS．GS；重金属胁迫；转基因 Abstract Abstract theactive distributedin andother Glutathione(GSH)istripeptidewidely plants，animals which to containsa metalions heavy organisms．GSHsulflhydrylgroup sequesters protect all Can freeradicalincells cellsfromstress eliminateactive antioxidant，it damage．As oxygen are metalstress ofGSHcontentincreasethe that under heavy conditions．So，increasemay cells’toleranceto metalstress．GSHis