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摘要
摘要
褶纹冠蚌(Cristariapl／cata)作为我国重要的淡水育珠蚌之一，易受病原体
感染而发生疾病，育珠能力产生了较大的影响，因此开展其分子免疫的研究具
有重要意义。超氧化物歧化酶(SOD)h～e清除生物氧化过程中所产生活性氧(ROS)
而对细胞具有保护作用。本研究对褶纹冠蚌icCuZnSOD基因进行了克隆和重组
表达载体构建，并对重组rCpSOD基因在大肠杆菌中进行表达和纯化，测定蛋
白活性及稳定性，并初步评估其功能。 ． 一-
I、EcoR
I双酶切之后，连接，构
eDNA全长，将基因和表达载体pET-30a经／q,n
同时加入或不加入cu2+／z．2+分别在37℃和20℃进行诱导，采用Ni2+亲和层析镍
纯化蛋白的方法，对包涵体和可溶蛋白分别进行纯化和活性测定，并考察活性
最高rCpSOD蛋白酶的热稳定性、pH稳定性和对变性剂的稳定性。用rCpSOD
小鼠抗血清对诱导的融合蛋白进行Western-blot分析抗原性。最后建立乙醇损伤
细胞的模型，探讨rCpSOD对乙醇损伤人L02肝细胞的保护作用。
SDS．PAGE结果表明，37℃诱导表达的蛋自主要是包涵体形式，而20℃诱
导则能够产生可溶性蛋白，并且在补充有Cu2+／Zn2+时有助于可溶rCpSOD的产
生。进一步的SOD酶活性分析表明，不管补充Cu2+／Zn2+诱导与否，在37℃和
20℃诱导的包涵体蛋白复性后活性都低于1000U／mg，且20℃比37。C诱导的包
涵体蛋白活性低；20℃诱导产生的可溶蛋白酶活性则明显升高，补充Cu2+／Zn2+诱
导产生的rCpSOD酶活性最高，达5300U／mg，说明在低温培养及补充Cu2+／Zn2+
时有利于可溶rCpSOD的体外诱导表达并且有利于其酶活性的提高。纯化的可
2-9内活性稳定，并可耐受8mol·L。的尿
溶性rCpSOD蛋白在温度60℃和pn
blotting分析，目的基因SOD的表达产物能够被鼠多克隆抗体特异性识别。此外，
在乙醇损伤人L02肝细胞模型中，结果表明有活性的rCpSOD酶可以保护L02
肝细胞免受氧化损伤。
关键词：褶纹冠蚌：超氧化物歧化酶；表达；活性测定；L02细胞
ABSTRACT
ABSTRACT
Thefreshwater
musselCrtaria iS of economical
plicata，whichgreat
andknown bivalves”inthe of
importance as‘pearl aquacultureindustryChina，has
been serious duetotheoutbreakof
sufferingproblems
ofthe of mussel
freshwateriscrucialfordiseases and
immunity management
ofsustainablemusselcultureand
development pearl
one of antioxidant involved
dismutases(SODs)are metalloenzymes
familyimportant
in
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