柑橘黄龙病菌侵染对甜橙叶片糖代谢的影响.pdfVIP

中国农业科学 2015,48(1):63-72 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2015.01.07 柑橘黄龙病菌侵染对甜橙叶片糖代谢的影响 1,2 1,2 1,2 2 2 2 1,2 吴 越 ，苏华楠 ，黄爱军 ，周 彦 ，李中安 ，刘金香 ，周常勇 1 2 （西南大学植物保护学院，重庆 400715 ； 中国农业科学院柑桔研究所，重庆 400712 ） 摘要：【目的】研究甜橙（ Citrus sinensis ）在柑橘黄龙病菌（Candidatus Liberibacter asiaticus）侵 染下不同时期糖代谢的变化，以探讨其与柑橘叶片中淀粉积累间的关系，为进一步阐明柑橘黄龙病的发病机理提 供理论依据。【方法】以甜橙为供试材料，采用腹接接种病原的方法，试验组植株用感染黄龙病菌的芽条进行嫁接， 对照组植株用健康芽条进行接种，每个植株均嫁接 3 个芽条。在检测到感病的植株中选取生长状况良好且接近的 3 株作为后续试验材料，每月采集 1 次成熟叶片，至 10 月份结束。采集的叶片立即抽提 DNA 和 RNA，并进行可溶 性糖及淀粉含量的测定，其余叶片用液氮速冻后保存于-80℃用于测定糖代谢过程中关键酶活性的变化，同时利用 实时荧光定量PCR技术比较二者关键酶基因表达量的差异。【结果】随着病原菌胁迫时间的延长，可溶性糖和淀粉 含量总体呈升高趋势，均在 6 月达到峰值，分别为对照的 1.59 和 3.73 倍，在感病后期开始有所下降；通过对二 者的比值分析发现，感病植株的比值随时间的延长不断下降。在黄龙病菌侵染的不同阶段，各种酶的作用程度有 所不同。感病植株的蔗糖磷酸合成酶（SPS）活性在感病初期迅速上升至顶峰，高达58.44 μg·g-1 -1 ·min ，至后期已 略微低于对照；酸性转化酶（AI）总体显示出较高活性，各个时期均有显著性差异（P ＜0.05），感病中期活性最 高为对照的2.91倍；中性转化酶（NI）活性在感病和对照中均维持较低水平，且变化趋势基本一致；可溶性淀粉 合成酶（SSs）与束缚性淀粉合成酶（GBSS）协调作用，共同参与淀粉合成的调控；淀粉酶活性在感病不同时期均 有所下降，在感病中期低至 0.38 U·g-1 。定量 PCR 分析表明，蔗糖磷酸合成酶基因 SPS1 表达量显著升高，与其酶 活性具有显著相关性（P ＜0.05）。蔗糖分解相关基因中，蔗糖合成酶基因SuSy 在感病不同时期的表达差异不大， 变化幅度小；细胞壁酸性转化酶基因 CSCWI 在不同时期均上调表达，最高上调约 7.4 倍，且表达量一直维持在较 高水平；与 CSCWI 相比，液泡酸性转化酶基因 CUAI1 的表达水平较低。淀粉合成相关酶ADP-葡萄糖焦磷酸化酶基 因最高上调3倍左右；淀粉分解相关基因BAM3、MEX1和DPE2 在不同时期有所下调，达到显著性差异水平（P ＜0.05）。 【结论】柑橘黄龙病感染甜橙后，对植株叶片中光合产物的形成与运转产生影响，扰乱宿主糖代谢平衡，与宿主 淀粉积累及后期症状的产生有密切关系。 关键词：甜橙；柑橘黄龙病；柑橘黄龙病菌；糖代谢；淀粉积累 Effect of Candidatus Liberibacter asiaticus Infection on Carbohydrate Metabolism in Citrus sinensis