丽江云杉体胚发及特异蛋白的研究.pdf

摘要：细胞全能性是指植物细胞具有全套遗传信息，不论是性细胞还是体细胞， 在特定环境下能进行表达，而产生一个独立完整的个体。体胚发生是植物细胞全 能性的一种表达方式。作为20世纪后期植物组织培养技术中的一个重大突破， 体胚发生技术无论在理论研究还是实际应用方面都具有非常重要的意义。 针叶树种在世界范围内分布很广，在整个林木类群中占有非常重要的地位， 但由于树种的特性，它们的体细胞胚胎发生被认为是难度最大的，但其中云杉属 树种的体胚发生相对容易，而成为针叶树种体胚发生研究的模式树种。 本论文以云南有分布的唯一云杉属树种丽江云杉(Picea Likiangensis)成熟 胚为外植体，分别从不同基本培养基、不同外源激素组合、不同基因型等方面探 讨了其胚性愈伤诱导的情况，获得其胚性愈伤诱导、增殖、体胚成熟和萌发等阶 段的培养基和培养条件，同时测定并分析了丽江云杉体胚发育各阶段材料的可溶 性蛋白含量及特异蛋白组分，研究为进一步开展其它针叶树种的体胚发生技术及 探索体胚发生分子机理奠定基础。研究结果如下： 1、获得了7个不同单株共331个丽江云杉体细胞胚胎发生的胚性愈伤 组织，为丽江云杉体胚快繁，针叶树种体胚发生机理和遗传转化研究提供充 分材料。 2、建立了丽江云杉体胚发生体系。(1)胚性愈伤诱导培养基： 112LM+2，4·D3mg·L-1+BA1．5mg·L-1；(2)胚性愈伤增殖扩繁保持培养基： (4)体胚萌发培养基：DCR+AC Io．2％}。暗中，室温或21-23。0中培养。 3、胚性愈伤组织的诱导研究表明：不同基本培养基、激素组合、基因 型其胚性愈伤组织诱导的结果截然不同。诱导胚性愈伤组织的较适培养基为 5．37％。 1／2LM+2，4-D3mg·L-1+BA1．5mg·L’‘，诱导率可达1 4、采用考马斯亮蓝G-250法测定了非胚性愈伤组织、胚性愈伤组织和 体胚4个发育阶段(球形胚、心形胚、鱼雷胚及子叶胚)的总蛋白质相对含 量，分析并获得其可溶性蛋白含量的动态变化特征。 5、采用SDS凝胶电泳对上述材料进行了特异蛋白组分的分析，结 果发现：非胚性愈伤组织有94KD、64KD、31KD特异蛋白的表达；胚性愈伤 60KD、58KD、45KD蛋白。研究结果将有助于进一步探索针叶树种体胚再生 基因调控的分子机理，以及外界因子对其调控机制，为针叶树种体胚再生基 础理论研究提供参考。 关键词：丽江云杉，体细胞胚胎发生，胚性愈伤组织，特异蛋白 Abstract：Cell referstothat cellshavethewhole totipotency plant genetic or and conditions，can information，eithergengrativesomatoplasm，ingiven express anintact somatic has toit．As into givenexpression grow plant．And embryogenesis one technical oflater20m in tissue century culture，the major breakthrough plant ofsomatic