离体大鼠脉络丛胞分泌神经营养因子规律的研究.pdfVIP

中文摘要 离体大鼠脉络丛细胞分泌神经营养因子规律的研究 摘 要 目的：各种原因造成的脑组织损伤是当今致死、致残的主 要原因，研究如何保护脐组织促进患者早日康复具有最大的经 济和社会意义。已有研究证实脉络丛能分泌包括神经生长因子 子(GDNF)等许多神经营养因子，对脑组织具有保护作用。但对 脉络丛细胞分泌神经营养因子的规律尚未明了。研究其分泌规 律，对选择脉络丛细胞进行移植的时机，有效发挥脉络丛细胞 分泌神经营养因子的保护作用具有重要意义。本研究选取一种 脉络丛分泌的神经营养因子一一转化生长因子B。作为指示因 子，动态观察体外培养的脉络丛细胞转化生长因子B1分泌的规 律，为脉络丛细胞移植细胞库的建立以及脉络丛移植的应用提 供实验依据及基础。 材料和方法：选取成年雄性Wistar大鼠30只，随机分成5 组，每组6只。将其颈椎脱臼后处死，立即头部酒精消毒，在 无菌条件下应用手术显微镜暴露侧脑室及第四脑室，游离并取 出脉络丛，彻底剥除外膜及血管。将提取的脉络丛组织洗净， 剪碎，经胶原蛋白酶消化后，过筛清洗后，纯化并鉴定。行台 盼蓝染色并计数活细胞后，调整细胞密度为2×10S／ml。将脉络 丛细胞悬液以接种子培养皿中，37C、5％C02孵箱静置培养。 每隔两天收集上清，--30℃保存。同时选取相同细胞密度的海 马组织细胞进行相互对照。在培养的第14天后将收集培养第2 中文摘要 上清液用间接酶联免疫吸咐法对培养液中的转化生长因子p1 的浓度进行测定。所测各组浓度用均数±标准差(i±s)表示。 所有结果应用SPSSl3．0软件包进行统计处理。对结果采用两样 H 检验等方法。检验标准采用p0．05有统计学意义。 结果：1．脉络丛上皮细胞形态观察和免疫荧光结果：在倒 置相差显微镜下观察，胶原酶消化后的脉络丛细胞成圆形，分 布均匀，活细胞占95％以上。在培养的最初48小时，多数细 胞呈圆形或椭圆形，部分细胞梭形或多边形。随着培养时间的 延长，圆形或椭圆形细胞聚集成团状或片状生长，2周后细胞 络丛细胞所特有，可作为成熟脉络丛细胞的标志物。对培养的 脉络丛细胞进行TTR免疫荧光检测显示绝大多数细胞为TTR 阳性，说明培养的细胞是脉络丛上皮细胞。 2．海马细胞形态观察：在倒置相差显微镜下观察，培养的 海马细胞为混合细胞，形态各异，分布均匀。培养12～24h大部 分细胞贴壁生长，3～4d细胞数量可见明显增加。随着培养时 间的延长，培养物中星形胶质细胞的比例越来越大，而神经元 及其它细胞成分的比例越来越小。原代培养9～14d，以星形胶 质细胞为主的细胞即可长满培养皿壁。培养的细胞胞体较大， 形状不规则，细胞突起多而长，符合星形胶质细胞形态。 3．脉络丛和海马细胞分泌的转化生长因子13。浓度变化趋 势：在培养后的第2天，脉络丛和海马培养液中即可检测到转 化生长因子13l的存在。随着时间的推移，海马细胞分泌的转化 生长因子131浓度变化比较平缓而脉络丛分泌的转化生长因子 中文摘要 B。浓度变化明显。在海马细胞，培养第2天分泌的转化生长因 子B1浓度为334．14±35．19 pg／ml，随后分泌的转化生长因子B 1浓度开始下降，第4天到第8天这个期问内分泌的转化生长因 子B 1的浓度逐渐回升。 34．82pg／ml。第lO天以后转化生长因子．B 在第12天和第14天，海马细胞分泌的转化生长因子B1浓度为 272．734-21．03 pg／ml。 pg／ml和290．76±8．38 在脉络丛上皮细胞，培养第2天分泌的转化生长因子B，浓 度为528±13．62 pg／ml。从培养第2天后脉络丛上皮细胞分泌的 转化生长因子B1浓度开始上升，到第4天达到一个分泌高峰， 泌的转化生长因子13 在第8天，脉络丛上皮细胞分泌的转化生长因子的浓度出