喉癌中微淋巴管度与血管内皮生长因子-d表达的研究.pdf

中文 摘 要 喉癌中微淋巴管密度与血管内皮生长因子一D表达的 研究 摘 要 目的:喉癌是耳鼻喉最常见的恶性肿瘤之一，癌细胞的 转移影响着喉癌患者的预后。过去，由于缺乏特异的标志物， 有一关肿瘤生长转移的研究几乎均将注意力集中在肿瘤及周 围组织血管生成上，很少有学者研究有关淋巴管的形成。 微淋巴管密度(Lymphaticmicrovesseldensity,LMVD)与 某些肿瘤的预后有关。血管内皮生长因子一D(Vascular EndothelialGrowthFactor-D,VEGF-D)，促进肿瘤血管生成 及淋巴管生成，促进肿瘤细胞通过淋巴管转移。 本研究采用 5-Nase-ALPase双重染色方法检测喉癌中 LMVD，采用免疫组织化学染色法检测VEGF-D在喉癌中的 表达，旨在讨论LMVD的临床意义，VEGF-D的临床意义以 及LMVD与VEGF-D表达的关系，对临床治疗及正确评估 预后提供一定的理论指导。 方法 1材料 采用2003年2月~2004年11月于河北医科大学第四医 院耳鼻喉一头颈外科住院手术治疗的45例原发喉癌患者新 鲜手术切除癌组织及45例相应的癌旁组织(距肿瘤边缘 0.5cm)。所有组织取材后即投入液氮中快速冰冻，后置于一 800C保存。 2.1酶组织化学染色方法 一一一一一一一一一一生主渔 头 采用美国Sigma公司试剂，切片染色后，光镜下观察口 2.2免疫组织化学染色 一抗为抗VEGF-D抗体(兔抗人)，SP试剂盒为北京中杉 金桥生物有限公司产品，以试剂盒提供之步骤操作。 3结果判定 3.1酶组织化学染色 选取有代表性的切片，首先在40X视野下确定每张切片 4个淋巴管最多区域，再在 l00X视野下计数每个区域的淋 巴管数，取其平均值。 3.2免疫组织化学染色 在 l00X视野下随机计数5个视野中的1000个肿瘤细 胞，按癌细胞免疫组化染色的结果分为阳性，阴性。没有着 色或着色细胞率10%为阴性(一)，着色细胞率)10%为阳性 (+)。 4统计方法 所有数据经Excel数据库整理，应用 SPSS11.0for windows统计软件包进行t,t检验，x2检验，以P0.05为 差异在统计学上有显著性意义，以P0.01为差异在统计学 上有非常显著性意义。 结果 1酶组织化学染色 1.1形态 光镜下，淋巴管为 5-Nase染色阳性(棕色)，血管为 ALPase染色阳性(蓝色)。正常粘膜内，淋巴管多与血管伴行， 位于粘膜及粘膜下层，管腔较血管大，管壁薄，形态不规则。 在肿瘤组织内部及周边可见大量淋巴管，位于肿瘤周边 2 中文 摘 要 的淋巴管多呈扩张或极度扩张状态，位于肿瘤内部的淋巴管 呈条索状，很少有开放的管腔。 1.2喉癌与正常粘膜LMVD比较 45例喉癌,LMVD为26.1512.81，正常粘膜为4.0711.86, 两者比较有显著性差异((P0.01). 1.3LMVD与临床参数的关系 45例喉癌中，男性39例，LMVD为26.25士2.95，女性 6例，为25.5士1.61，无统计学差异(P0.05);年龄大于等于 62岁者，LMVD为26.20士3.05，小于62岁者为26.10士2.57, 无统计学‘差异(P0.05);临床I、II期LMVD为24.5212.53, fit,IV期为28.0111.77，有统计学差异(P0.01);声门上型 LMVD为26.20士2.42，声门型为26.08士3.25，无统计学差异(尸 0.05);淋巴结阳性组 16例，LMVD为28.1411.77,淋巴结 阴性组为29例，为25.05士2.69，两者有显著性差异(尸0.01). 2免疫组织化学染色 正常喉粘膜 VEGF-D偶有表达，45例喉癌标本中 VEGF-D表达阳性14例，阴性31例，阳性率31.1%(14/45); 其中13例为淋巴结阳性者，1例为淋巴结阴性者，经x2检 验，VE