大鼠不完全缺血灌注后β-淀粉样蛋白和早老素蛋白-1的表达及意义.pdf

郑州大学2006硕士研究生论文 大鼠不完全缺血再灌注后淀粉样蛋白和早老素蛋白一1的表达及意义 大鼠不完全缺血再灌注后B一淀粉样蛋白和早 老素蛋白一1的表达及意义 研究生 陈烈冉 导师 张博爱教授 郑州大学第一附属医院神经内科 郑州 450052 中文摘要 随着老龄社会的到来，阿尔茨海姆病(AD)的发病率和患病率都随着人口平 均寿命的不断提高而显著增加，是老龄期痴呆的首要病因。AD在西方发达国家己构 成严苇的公共卫生问题。因而，AD发病机制和治疗的研究是近年国内外神经系统 变性疾病研究的重点。 研究发现一些基因的突变或多态性是AD重要的危险因素，家族早发性AD丰要 是由APP、Ps—l、Ps一2这三个基因突变造成的。但绝大多数AD患者是迟发的、散 发的，不能用基因学说完美的解释。这促使人们寻找新的AD发病危险因素和机制。 近年来国内外一些研究发现与心脑血管疾病相联系的危险因素同时也是AD的 重要危险因素，同时研究发现高达60％一100％的AD患者脑组织中呈现各种各样 的腑血管病弹改变。AD和脑血管事件在危险因素和病理改变上的交互重叠引起了 人们对血管性因素在AD发病机制中作用和地位的重视，AD和脑血管疾病作为老龄 期大脑最常见两种疾病，它们之间是否存在内在的联系值得研究。 cascade B一淀粉样蛋白瀑布假说(Amyloid 病机制学说，该学说认为AB在大脑中的牛成和沉积是AD发病机制中早期的、彳； 变的和必要的事件，是各种类型AD发病的共同通路。本实验目的之一是观察大鼠 郑州大学2006硕士研究生论文 大鼠不完全缺血再灌注后淀粉样蛋白和早老素蛋白一1的表达及意义 不完全缺血再灌注损伤后AB是否表达以及表达的规律，从而确定脑血管事件能否 通过诱导AB表达的增加而参与B一淀粉样蛋白瀑布机制。 Ps—l的结构和生理功能目前尚不完全清楚。研究发现载有突变Ps一1基因的神 经元经历损伤后更容易发生凋亡。缺血发生后海马cAl区发生迟发性神经元死亡 neuron (DelayedDeath，DND)，DND的发生存在众多的机制。本实验的第二个目 的是观察大鼠不完全缺血再灌注模型不同时间点海马cAl、cA3区域Ps—l的表达 变化，比较Ps一1在海马不同部位表达的差异，分析与DND的关系。 实验流程 1、动物分组方法 健康雄性sD大鼠30只，体重在450一5509之间。随机分 手术对照组。 2、动物模型制作 暴露大鼠两侧颈动脉，近远端双重结扎其中一侧，结扎牢固 后剪断血管。用无创动脉夹夹闭另一侧颈动脉，造成暂时性血流闭塞。夹闭2h后放 开动脉夹，使血流再通。假于术对照组动物只进行相似的步骤，而不阻断血流。 3、标本收集与处理 在规定时间点断头取脑，置入4％多聚甲醛中后4℃冰箱 内固定24小时，经梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，制作脑部冠状石蜡切 片(厚度3um)，以备HE染色和免疫组化染色。 4、观察指标 HE染色观察缺血再灌注后cAl神经元在不同时间点的变化；采 用免疫组化观察AB和Ps一1表达的位置和数量的变化。 5、统计学处理 以o=o．05作为检验水准，实验数据用均数±标准蔫 (x±s)表示。应用sPssll．O统计软件进行数据处理，多组均数间比较采用单因 素方差分析，两组之间比较用t检验。 郑州大学2006硕士研究生论文 大鼠不完全缺血再灌注后淀粉样蛋白和早老素蛋白一1的表选及意义 结果 1．不完全缺血再灌注后6h，皮质A B的表达并无明显增强(po．05)，4d开 于消失，呈明显的下降趋势，但与对照组相比仍未完全恢复正常(pO．05)。由于 本实验仅观察到35d，AB何时完全消失尚不清楚。 计学意义外，其他各组均与对照组Ps一1光密度值无统计学差异。而cA3区Ps一1的 (D0．05)。 结