河北省肾综合征血热主要流行区汉坦病毒的基因变异研究.pdf

目 录 中文摘要…………………………………………………………………………．．1 英文摘要…………………………………………………………………………．5 研究论文河北省肾综合征出血热主要流行区汉坦病毒的基因变异研究 …………………………………………………………………………………………………” 前言…………………………………………………………………………………………………．．8 胃lj舌 材料与方法…………………………………………………………………．．9 结果……………………………………………………………………………………．17 附图…………………………………………………………………………．22 附表…………………………………………………………………………．36 讨论…………………………………………………………………………………………………··44 结论…………………………………………………………………………·47 参考文献………………………………………………………………·47 综述汉坦病毒的基因分型及分子流行病学研究进展…………………．49 致谢………………………………………………………………………………………………………”56 个人简历……………………………………………………………………··57 中文摘要 河北省肾综合征出血热主要流行区汉坦病毒的基因变异研究 摘 要 目的：了解河北省肾综合征出血热(印?RS)主要流行区疫情变化特 征，研究该地区宿主动物所携带汉坦病毒(Hv)基因型别和随时问基因 变异情况，指导对本病的预防和控制。 方法：． 主要流行区宿主动物的密度、带毒率和鼠种构成等流行病学资料变化特征。 2夹夜法捕鼠，无菌取鼠肺，用冷冻切片机切鼠肺，冷丙酮固定，间 接免疫荧光法(IFA)筛选Hv阳性鼠肺。 3从阳性鼠肺和保存毒株中提取总RNA，应用荧光定量PCR进行基 因分型。 4 段的产物纯化后经TA克隆连接入pMDl9．T质粒载体，转化入DH5a菌。 5筛选阳性重组质粒，提取后测序，用DNAStar软件进行序列拼接后， 用分子进化方法和软件分析病毒核苷酸和氨基酸的同源性，并构建系统发 生树，对河北省主要流行区鼠携带HV的核苷酸变异及特征进行分析。 6应甩软件进行数据处理和统计分析。 结果： 1河北省东北部唐山和秦皇岛市自2001年以来，HFRS发病率明显 河北省I-IFRS病例总数的90％，目前是我省HFRS的主要流行区。 为2．75％，野外为1．16％，二者有逐年上升的趋势。两地市平均鼠带毒率 为10．29％，：‘其中居民区为11．23％，野外为2．96％。居民区与野外鼠密度、 带毒率总体均有显著性差异。 唐山和秦皇岛市2009．2013年鼠类种群构成经分类鉴定，居民区和野 外的主要优势鼠种都是褐家鼠，但居民区与野外的鼠种构成具有显著性差 E玉 升。 中文摘要 3对河北省I-IFRS主要流行区IFA阳性鼠肺及毒株采用实时荧光定量 发现HTN型。 4选择研究需要有代表性标本扩增G1、G2基因片段并测序，共获得 13个G1片段和14个G2片段序列。HV 18 比较也为100％。与R22株进行比较，同源性较高，为94．5％．96．3％，与76—1 株的同源性较低，仅为69．9％一71．8％。I-IV 序列同源性比较结果表明，同源性高达97．4％．100％，其中93HBQ3、 1 均为100％。与R22株和76．18株的同源性比较分别为90．8％．92．7％和 71．3％。72．6％。可见同型之间M片段的基因序列相对比较保守，提示HV没 有发生较大的基因变异。 HBT14／2012、HBT49／2013、HBT50／201 关系较近，均属于SEO型病毒的S3亚型。G2片段系统进化树显示， HBT67／2011、HBT69／201