热疗对紫杉醇抑肺肿瘤细胞的促进作用及其机制.pdf

热疗对紫杉醇抑制肺肿瘤细胞 的促进作用 及其机制 博 士研 究生 : 王琳 导师 : 吴逸 明教授 郑 州 大 学 公共 卫 生 学 院 郑 州 45000 1 中文摘 要 肺癌 的发病 率和 死 亡 率 正在迅速 上 升 ，在 很 多发达 国家 ，肺癌 的发病 率 占男性 常 见 恶 性 肿 瘤 的第 一位 ，女性 常 见 恶性 肿 瘤 的第 二 、三位 ; 肺 癌 的组 织 学类 型 也在 发 生 显 著 变 化 ，腺癌 的发病 率 不 断上升 。虽然 手 术 治疗 、化 学 治疗 、放 射 治疗 、免疫 治疗 及 综 合 治疗 等 都取 得 了长 足 发 展 ，但 在 美 国肺 癌 患者 5 年 的生存 率仅 为 巧% ，欧洲 不 过 是 10% ， 发展 中 国家 则 不 到 8.9% 。化疗 药物 紫 杉 醇 (TA X )抗肿瘤 效 果显著 ，取得 了较 好 的临床 疗 效 。肿 瘤 热疗 在肿瘤 综 合 治疗 中显示 了 良好 的效果 ，加 热 不会 增 加 药物 的细 胞 毒性 效应 ， 所 以，热疗 增 加 肿 瘤 细 胞 对 化 疗 的敏 感 性 受 到越 来 越 多 的重 视 ，因此 ，本研 究 旨在验 证 热疗 促 进 TA X 对肺 肿 瘤 细 胞抑 制 作 用 的发 生及 其 机 制 。 研 究方法 1. 热疗 与 TA x 联合应用对肺 部细胞生物 学特 性 的影 响 采 用 人 肺 腺 癌 A 54 9 细 胞 、人 小细 胞肺 癌 N CI一H 446 细 胞 和 人 呼吸道 上 皮 B E A S一ZB 细 胞 ，每 种 细 胞 分 别采 用 3 种 方 式 处 理 ，即对 照 组 、TA X 组 和 43 ℃+ TA x 组 (见表 1); 倒 置 显微 镜 观 察 细 胞 形 态 ，照 相 记 录 ，唆 哇 蓝 比色 法 检 测 细 胞 增 殖 率 ; 提 取 细 胞 总 蛋 白，按 L D H K it要 求 检 测 L D H 活 力 ，划 痕 实验 检 测 细 胞 损 伤 修 复 能力 ，荧光 H oech st 33342爪I 双 染 法 以及 提 取 细 胞 D N A L adder 检 测 细 胞 凋 亡 。 2. 细胞 内重要信 号传 导通 路在 热疗 与 TA X 诱 导肺肿瘤 细胞增殖过程 中的 作用及 其相 互关系 采 用 人肺 腺癌 A 54 9 细胞和 人 小细胞肺 癌 N C I一H 446 细胞 ，每种 细胞 分别采 用 6 种 方 式 处理 ，即对 照 组 、TA X 组 、43 oC+TA X 组 (见表 l)和 sp 600 125 组 (4 3oC+TA X 组加 入 JN K 信 号转 导通 路抑 制剂 Sp 600 125)、wo rtm arni in 组 (43oC+认 x 组加入 A kt通 路抑 制 剂 w ortm ann in)、N A C 组 (43oC+T A X 组 加 入 R O S 抑 制 剂 N A C ); 分 别检测 各组 R O S 、 p一JN K 、p一A kt 以及 C aspase一3 等 的表 达变 化 ，并用流 式细胞 术检测细胞凋亡率和细胞周 期 的变 化 ， 同时做 体 内实验 的验 证 。 3.H sP 70 在热疗 与 T A x 抑制肺肿瘤细胞作用 中的地位 采 用人肺 腺癌 A 54 9 细胞 、人 小细胞肺 癌 N cl一H 446 细胞和 人 呼吸道 上皮 B E A S一ZB 细 胞 。每种细胞 分别采 用 4 种 方 式处理 ，即对 照组 、T A X 组 、43 ℃+TA X 组和 43 ℃组 (见 表 l); 检 测 各组 H SP 7O 的表达 变 化 ， 同时做 体 内实验 的验 证 。 表 1 实验分组 明细表