生化实验课二血浆IgG的分离制备及凝胶层析脱盐.ppt

* * 教学目的： 血浆IgG的分离制备及凝胶层析脱盐 掌握蛋白质分段盐析的原理及操作； 掌握凝胶层析脱盐的原理； 掌握柱层析操作方法。 分段盐析的原理及操作； 凝胶过滤层析原理以及层析过程中几个关键 环节的把握。 重点难点： 加入的饱和硫酸铵溶液体积？ 离心机的使用 如何？为什么？ 防盐局部浓度过高 层析脱盐原理 两种分子筛效应区别 一. 原理及操作 V0： 蛋白质溶液的原始体积 C2： 所要达到的硫酸铵溶液饱和度 C1： 原来溶液硫酸铵溶液饱和度 V： 应加入的饱和硫酸铵溶液体 C2 － C1 V = V0 100 － C2 离心机的使用： 1. 2支离心管在台秤上平衡； 2. 对称放入离心机； 3. 盖盖，开电源，定时； 4. 转速逐步达到设定； 5. 待完全停机； 6. 转速回0，开盖。 葡聚糖凝胶层析原理 层析操作： 3个组成部分； 开机，开夹洗柱； 检查至无盐； 停止洗脱； 待洗脱接近柱面； 夹住出口。 提前清洁15支小试管，各加奈氏试剂1滴； 约1mL滤液上样，开夹至样液接近胶面，开始洗脱； 至磺基水杨酸检查蛋白出现起开始用试管收集； 每管收集2滴，至磺基水杨酸检查没有蛋白出现止。 层析操作： 二. 实验结果： 上样后多少滴开始出现蛋白？ 蛋白管数？ 纯蛋白管数？ 三. 实验报告的格式及要求： 分段盐析原理； 凝胶过滤层析原理； 盐析操作用流程图； 层析操作用简洁的文字叙述； 报告层析结果； 分析总结实验成败的关键环节。 四. 思考题 盐析时为什么要防止局部浓度过高？ 列举蛋白质初级纯化还有哪些方法？ 凝胶过滤层析与凝胶电泳中的分子筛效应 有什么不同？为什么？ * *