蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠模型细胞因子的影响.docVIP

蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠模型细胞因子的影响 　　【摘要】目的：观察蠲痹汤对类风湿关节炎大鼠关节炎指数（AI）、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的影响，探讨蠲痹汤治疗类风湿关节炎的免疫机制。方法：将大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、甲氨喋呤对照组、蠲痹汤高/低剂量组，制备类风湿关节炎大鼠模型，给药组以不同剂量蠲痹汤灌胃，对照组代以生理盐水，检测AI、血清细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10的表达。结果：与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明显上升，IL-10、IL-4水平明显下降（P005），蠲痹汤高剂量组能显著升高模型大鼠IL-10水平（P001）。结论：蠲痹汤对类风湿关节炎模型大鼠TNF-α等炎症因子具有干预作用，提示蠲痹汤可通过抑制炎性细胞因子TNF-α、IL-1的表达，促进抗炎细胞因子IL-10的分泌，从而达到治疗RA的效果。 　　【关键词】蠲痹汤；类风湿关节炎；大鼠模型；细胞因子 　　【中图分类号】R2855【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）14-0001-02 　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）属难治性疾病，临床多采用化学药物或生物制剂进行治疗，但疗效不稳定。蠲痹汤出自清代程国彭所著《医学心悟》，由独活、桂心、秦艽、当归、川芎、炙甘草、海风藤、桑枝、乳香、木香组成，具有祛风除湿、益气活血、蠲痹止痛等功效，是临床治疗类风湿关节炎的常用方剂，疗效显著[1-3]。为探讨其作用机制，本研究通过制备类风湿关节炎大鼠模型，以血清细胞因子为观察指标，观察蠲痹汤对类风湿关节炎的免疫调节作用，为进一步研究蠲痹汤治疗类风湿关节炎的作用机制提供实验依据。 　　1材料与方法 　　11实验动物Wistar大鼠50只（180±20）g（雌雄分笼），由贵阳医学院实验动物中心提供[许可证号：SCXK（黔）2002-0001]。 　　12药材与试剂蠲痹汤：按原方比例常规方法制备水煎剂，调整浓度为01g生药/ml，滤过除菌，置4℃备用；甲氨喋呤（上海华联制药有限公司）；完全福氏佐剂（Sigma公司）；大鼠细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10、IL-4检测试剂盒（上海拜力生物科技有限公司）。 　　13仪器EIX808U型全自动酶标仪（美国BioTek）。 　　2实验方法 　　21动物分组动物购回适应性饲养1周后，随机分为2组。正常对照组大鼠10只；模型组大鼠40只，造模后又随机分为模型对照组、甲氨喋呤对照组、蠲痹汤高剂量组、蠲痹汤低剂量组，每组10只。 　　22大鼠类风湿关节炎模型的制备[4]模型组大鼠左后足跖皮内注射完全福氏佐剂，01ml/只，建立佐剂性类风湿关节炎大鼠病理模型。 　　23给药方法造模后第7d，甲氨喋呤对照组按12mg/kg灌服，1次/d，连续2周；蠲痹汤高、低剂量组分别按22g/kg、11g/kg灌服，1次/d；正常对照组和模型对照组灌服等量生理盐水，每天一次，连续给药2周。 　　24关节炎指数（arthritis index，AI）的计算[5]大鼠致炎后第12d开始观察并记录关节病变程度，每4d1次，病变按5级分法评价，根据未注射佐剂的余下肢体的病变程度累计积分，计算出AI。0分：无红肿；1分：小趾关节红肿；2分：趾关节和足趾肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；4分：包括踝关节在内的全部足爪肿胀。把各个关节的积分累计起来，即为每只大鼠的AI。 　　25指标检测末次灌胃12h后开始禁食（不禁水），24h后股静脉取血，分离血清，细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10水平的检测均按试剂盒说明书操作。 　　26统计分析数据分析采用SPSS170软件进行，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，P005表示差异有统计学意义。 　　3结果 　　31对类风湿关节炎大鼠关节炎指数的影响由表1可知，致炎后16d，蠲痹汤高剂量组大鼠关节炎指数显著低于模型对照组（P005）。 　　32对类风湿关节炎大鼠血清细胞因子水平的影响由表2可知，与正常对照组比较，模型对照组大鼠血清细胞因子TNF-α、IL-1β水平明显上升，IL-10、IL-4水平明显下降，差异有统计学意义（P005）。蠲痹汤高剂量组能显著升高模型大鼠IL-10水平（P001）。 　　4讨论 　　类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种累及周围关节为主的多系统性自身免疫性疾病，属于中医学“痹证”范畴。多因风寒湿热等外邪侵袭人体，闭阻经络，气血运行不畅所致。本病较为常见，且是顽固的慢性关节炎症性病变，常侵犯四肢小关节，可引起全身的关节肿胀疼痛及功能障碍，并可伴有关节外的