抗人肝癌免疫毫微粒的制备及体外免疫学性质的鉴定.docVIP

抗人肝癌免疫毫微粒的制备及体外免疫学性质的鉴定 　　[摘要] 目的 研究抗人肝癌免疫毫微粒的制备以及对靶细胞的杀伤作用。 方法 使用异型双工能SPDP对人肝癌以及载阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒进行偶联，通过实验对其的免疫特性进行测试。检测的方法使用MTT法，这种方法的检测对免疫毫微粒是否能够对体外具备杀伤的作用十分有效。检测后在人肝癌老鼠模型上使用HAb18-HSA（ADM）-NS、HSA（ADM）-NS 和ADM， 来测试其对肝癌的抑制情况。结果 HAb18抗体可以偶联到毫微粒上，对体外杀伤的细胞值为45.5 μg/mL，与ADM的366.1 μg/mL比较下，明显了降低。免疫毫微粒能够和靶细胞结合并且对靶细胞具有杀伤和选择功能。 结论 偶联的方法适用制备肝癌免疫毫微粒，并且免疫毫微粒在对抗肝癌治疗上有着明显的效果，值得推广使用。 　　[关键词] 人肝癌；免疫毫微粒；制备；免疫鉴定 　　[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）06（c）-0180-02 　　在我国每年发生肝癌致命的病例有很多，肝癌导致死亡的概率列居肿瘤致死忘总概率的第二。可想而知，肝癌对于人类产生的危害是巨大的，给患者和医师带来了很多困扰。关于治疗肝癌的免疫毫微粒很多专家开始进行研究。具有免疫性的毫微粒具有很大的载药性，而且这种微粒还具有缓释药物，不需要进行偶联的特点，另外，毫微粒在病位进行药物治疗时还具有选择性，因此得到很多专家医生的青睐[1]，选取2012年3月―5月间50只裸鼠为研究对象，现报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　收集了50只实验裸鼠，鼠龄在4～8岁之间，裸鼠为BALB/C型老鼠，50只裸鼠是有江西某以医学院提供的。从人肝癌细胞中提取细胞株，ADM-NS的含量控制在34%左右，平均直径在300 nm，需要被保存于温度为5 ℃的环境下。使用浓度为21 mmolPL的异型双功能交联剂实现偶联， 　　1.2 方法 　　使用异型双工能SPDP对人肝癌以及载阿霉素（ADR）和人血清蛋白微粒进行偶联，通过实验对其的免疫特性进行测试。检测的方法使用MTT法，这种方法的检测对免疫毫微粒是否能够对体外具备杀伤的作用十分有效[2]。检测后在人肝癌老鼠模型上使用HAb18-HSA（ADM）-NS、HSA（ADM）-NS 和ADM，来测试其对肝癌的抑制情况。选用的ADM主要从江苏某制药厂调购过来，抗人体肝癌的抗体由军医院提供。 　　使用9 mL的单抗经0.04 mol pL，PH值为7.6，在单抗经中加速SPDP10L1，在常温下进行搅拌，搅拌的事件控制在0.5 h，然后使用PBS进行洗脱。免疫毫粒选用29 mg，进行超生均匀化，和单抗经一样加上同量的SPDP，并且进行30 min的搅拌，然后用醋酸溶解液进行清洗，清洗后留下的沉淀就是NP=PDP，把沉淀混入到醋酸液水中放于常温下的室内，这样是为了还原NP-PDP。还原后使用离心洗涤剂进行清洗剩余下来的NP-PDP-SH和Ab-PDP混合，在常温下的室内进行振荡，振荡20 h左右后，使用PBS进行多次洗涤，最后剩余的沉淀就是免疫毫微粒[3]。 　　1.3 主要仪器 　　制备免疫毫微粒的仪器主要是第二代LXJ离心机，该仪器是由上海某医用工厂生产的；制备过程中使用的搅拌机时由浙江某仪表工产生产的D40-2F电动型搅拌机；观察实验效果采用的显微镜是型号为PM-VBAD的荧光和倒置显微镜，该型号的显微镜是由日本公司生产的；自动定标器是由我国北京某仪器厂生产的型号为FH463A；活度器由CII公司生产的型号为CRC-15R活度仪；最后使用的光度仪是由上海分析仪器厂生产的型号为751的紫外线外分光光度计[4]。 　　1.4 免疫毫微粒免疫性的鉴定 　　鉴定 HAb18-HSA （ADM）-NS 时使用的是间接凝结实验，具体做法如下：首先在选用的载波试验片上滴上浓度为505 μg/mL的 HAb18-HSA （ADM）-NS，然后加入选择的裸鼠的抗血清，加入血清后要不间断的进行振荡，同时在光镜下观察其变化情况；免疫荧光：使用502 μg/mL、101 μL的HAb18-HSAADM）-NS和IgGh混合，在30 min的4 ℃温度下进行染色，使用离心洗涤后观察其变化，观察时使用的是前面使用的PM-VBAD的荧光显微镜[5]；鉴定体外和细胞活性：在SMMC-7721 中加入HAb18-HAS （ADM）-NS和 HAS （ADM）-NS ，加入的两种HAb18-HAS （ADM）-NS，HAS （ADM）-NS浓度均为 500 μg/mL，并且同上在4℃的室内进行30 min反应，然后观察变化；使用扫描电镜观察：取500 μ