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两种南海海绵放线菌的分离和培养研究 　　摘要：利用3种培养基对两种南海海绵Axinyssa和Halichondria共附生的放线菌（Actinobacterial）进行分离和培养，共得到41个放线菌菌株，分别属于Brachybacterium、Janibacter、Dermacoccus、Brevibacterium、Saccharomonospora、Arthrobacter、Micromonospora、Tsukamurella和Streptomyces 9个属的14个种，其中Y12和Y13为候选新种属。这些放线菌能抑制金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的生长，其分子方法显示这些放线菌具有产生聚酮类化合物和非核糖体多肽的潜力。 　　关键词：海绵；微生物多样性；放线菌（Actinobacterial） 　　中图分类号：Q93 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）13-3002-04 　　Isolating Actinobacteria from Two Marine Sponges of the South China Sea 　　OUYANG Yong-chang，LIANG Zi-tian，YAO Ya-qi，FENG Ying，WANG Peng-fei 　　（Department of Biotechnology，Guangzhou Medical College，Guangzhou 510182， China ） 　　Abstract： 41 strains of actinomycetes were isolated from two marine sponges collected from the South China Sea by 3 culture medium. Based on sequencing 16S rRNA genes， these isolates were divided into 9 groups initially identified as genera Brachybacterium， Janibacter， Dermacoccus， Brevibacterium， Saccharomonospora， Arthrobacter， Micromonospora， Tsukamurella and Streptomyces by phylogenetic analysis. Among them， Y12 and Y13 may be new genera. All isolates could restrain the growth of Staphylococcusaureus，Bacillus subtilis and Escherichia coli， and had potential to produce polypeptide and nonribosomal peptide. 　　Key words： marine sponge； diversity of bacteria； actiobacteria 　　随着多抗性病原菌的流行，开发新抗生素的需求越来越迫切。放线菌（Actinobacterial）富产的次生代谢产物是抗生素开发的重要资源。目前，超过100个应用于农业和人类疾病治疗的抗生素来源于放线菌[1]。但随着研究的深入从放线菌中发现新次生代谢产物越来越难，主要原因之一是缺乏新放线菌资源。为寻找新的放线菌，21世纪以来研究者开始将目光投向独特的海洋环境，迄今已从海洋样品中培养出海洋专属的放线菌，如Salinispora等，并从其中发现了新颖的化合物Salinosporamide A[2]。 　　海绵属多孔动物门，与其共附生的微生物丰富，富含活性产物。目前从海绵中分离得到的活性代谢产物占已发现海洋天然产物的40%，海绵已成为最大的新药候选分子来源[3]。从海绵中得到的大部分活性产物来源于与其共附生的微生物。Zhang等[4]和Jiang等[5]的研究表明海绵富含新放线菌资源，但只有很少一部分微生物能在实验室培养，剩余绝大部分是未培养的微生物资源。本试验对中国南海两种海绵中可培养的放线菌进行研究，获得了多样性丰富的放线菌，其中包括多株候选新种，分子试验和抑菌活性筛选表明，这些放线菌富产聚酮和非核苷酸多肽等活性产物。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　两种海绵采自中国南海三亚海区（18.3°N，109.5°E），经鉴定分别属于Axinyssa和 Halichondria两个属。海绵样品经低温保存后于实验室处理。 　　1.2 放线菌的分离与培养 　　取海绵5 g，用无菌水冲净表面泥沙后置于培养