耐甲氧西林葡萄球菌常规检测方法的比较.docVIP

耐甲氧西林葡萄球菌常规检测方法的比较 　　摘要：目的 比较三种方法对耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的阳性检出率和特异性，寻找适合实验室常规检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）简易，准确的方法。方法 通过头孢西丁（30μg/片）纸片扩散法、苯唑西林（1μg/片）纸片扩散法和苯唑西林琼脂筛选法对临床分离的67株葡萄球菌进行MRS检测，比较其MRS检出率，为分析NaCl对头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测结果的影响，同时用含4%NaCl的M-H培养基和普通M-H培养基进行检测，比较其差异。结果 67株葡萄球菌中琼脂筛选法检出率为79.1%；头孢西丁纸片扩散法在含4%NaCl和普通M-H培养基检出率相同，均为71.6%，苯唑西林（1μg/片）纸片扩散法在含4%NaCl的M-H培养基检出率为76.1%，普通M-H培养基检出率为73.1%，苯唑西林纸片法在含4%NaClM-H培养基上的检出率高于普通M-H培养基，分别各有1株金葡和凝固酶阴性葡萄球菌未被检出。结论 头孢西丁（30μg/片）纸片扩散法与苯唑西林琼脂筛选法具有很好的相关性，且不受NaCl影响，该法操作简便易行，各医院临床实验室均能开展，是检测MRS值得推荐的方法。 　　关键词：耐甲氧西林葡萄球菌；头孢西丁纸片扩散法；苯唑西林琼脂筛选法；mecA基因 　　1资料与方法 　　1.1一般资料 　　1.1.1菌株 2012年3月～11月从本院检验科临床标本分离到的葡萄球菌67株，其中金黄色葡萄球菌（SA）31株，凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）36株，保存于-20℃低温冰箱，实验前转种于5%脱纤维羊血培养基备用，参考菌株：ATCC25923为MRS阴性及药敏试验质控菌株，ATCC43300为MRS阳性质控菌株。均由云南省临床检验中心提供。 　　1.1.2试剂和材料 药敏纸片：头孢西丁（30μg/片，批号：2001210）、苯唑西林（1μg/片，批号：201209），北京天坛生物技术开发公司生产；苯唑西林标准品，山东瑞阳制药有限公司生产；批号M-H培养基，杭州天和微生物试剂有限公司生产；批号：120422；MRS琼脂筛选培养基：配制M-H琼脂培养基（OXAID公司产品；批号：201212），加入NaCl使其浓度达4%，经高压灭菌，冷却至50℃时加入苯唑西林，使其最终浓度为6μg/ml，倾注培养基。金葡萄菌乳胶凝集诊断试剂盒Staph Slidex-kit，法国生物梅里埃公司产品，批号：73115。 　　1.2.方法 　　1.2.1 菌种鉴定 临床标本按常规进行分离培养，对所有分离到的葡萄球菌用金葡萄菌乳胶凝集诊断试剂盒Staph Slidex-kit进行鉴定。 　　1.2.2 菌液制备 按NCCLS标准进行，挑取孵育18～24h的单个菌落以生理盐水稀释至0.5麦氏单位比浊标准备用。 　　1.2.3头孢西丁（30ug/片）纸片扩散法：取0.5麦氏单位菌液均匀涂布于含4%NaClM-H培养基和普通M-H培养基，贴30μg/片头孢西丁药敏纸片35℃24h观察结果（CNS孵育48h），SA抑菌圈直径≤21mm，报苯唑西林耐药，CNS抑菌圈直径≤24mm，报苯唑西林耐药。质控菌株为SA ATCC 25923。 　　1.2.4苯唑西林纸片扩散法 将0.5麦氏单位的菌液均匀涂布于含4%NaClM-H培养基和普通M-H培养基，贴1μg/片苯唑西林药敏纸片35℃24h观察结果（CNS孵育48h），SA抑菌圈直径≤10mm为耐药，SA抑菌圈直径在11～12mm为中介，SA抑菌圈直径≥13为敏感，CNS抑菌圈直径≤17mm为耐药，CNS抑菌圈直径≥18mm为敏感。质控菌株为SA ATCC 25923。 　　1.2.5 苯唑西林琼脂筛选法 制备含6μg/ml苯唑西林、4%NaCl的筛选M-H琼脂培养基，将校正过的0.5麦氏单位菌液点种于上述培养基上，SA35℃孵育24h，CNS48h观察结果。在此平板上只要有一个菌落生长即判断为MRS，不生长的为甲氧西林敏感葡萄球菌（MSS）。质控菌株为ATCC 43300。 　　2结果 　　2.1 67株葡萄球菌中乳胶凝集实验凝集有31株，定性为金黄色葡萄球菌。33株葡萄球菌中乳胶凝集实验阴性，定性为凝固酶阴性葡萄球菌。 　　2.4 三种方法对MRS的检出结果比较 从实验结果看，三种方法对MRS的检出率具有较高的符合率，分别为头孢西丁纸片法71.6%、苯唑西林纸片法76.1%（4%NaClM-H），73.1%（普通M-H）、琼脂筛选法79.1%。其中头孢西丁纸片法在4%NaClM-H和普通M-H上检出结果相同。但几种方法的检测结果也存在差异，苯唑西林纸片法在含4%NaClM-H培养基上的检出率高于普通M-H培养基，分别各有1株金葡和凝固酶阴