紫癜性肾炎患儿血清IgA1通过系膜细胞―足细胞轴对足细胞增殖及TNF―α分泌的影响.docVIP

紫癜性肾炎患儿血清IgA1通过系膜细胞―足细胞轴对足细胞增殖及TNF―α分泌的影响 　　[摘要] 目的 观察过敏性紫癜性肾炎（HSPN）患儿刺激系膜细胞-足细胞轴及直接刺激足细胞对细胞增殖及肿瘤坏死因子（TNF）-α分泌的影响，从而探讨在HSPN发病机制中IgA1引起足细胞损伤的作用机制。 方法 采用层析法获得HSPN患儿及健康儿童血清单聚体IgA1（mIgA1），并热聚合为聚合IgA1（aIgA1），分别采用HSPN患儿aIgA1与系膜细胞共培养上清（aIgA1-MES上清组）、HSPN患儿的aIgA1（HSPN组）及健康儿童的aIgA1（健康儿童组）刺激足细胞，三组均采用50、100、250 μg/mL三种浓度的aIgA1；并设不含aIgA1的阴性对照组。采用噻唑蓝（MTT）法检测刺激24 h 及48 h足细胞的增殖情况；收集培养48 h 的细胞培养基上清，用酶聚免疫吸附测定（ELISA）法测定TNF-α的水平。对比分析不同浓度的aIgA1对细胞增殖和TNF-α分泌水平的影响。 结果 24 h MTT结果显示，aIgA1-MES上清组刺激足细胞在aIgA1浓度为100、250 μg/mL的aIgA1中OD值明显低于阴性对照组（P 0.05）；48 h MTT结果显示，IgA1-MES上清组在三种aIgA1浓度下足细胞OD值明显低于阴性对照组（P 0.05）；三种aIgA1浓度的aIgA1-MES上清组刺激足细胞分泌TNF-α含量较阴性对照组明显升高（P 0.05）。 结论 HSPN患儿aIgA1不能直接刺激足细胞造成细胞损伤，而是通过系膜细胞-足细胞轴抑制足细胞的增殖，并诱导足细胞分泌TNF-α水平增加。 　　[关键词] 紫癜性肾炎；IgA1；系膜细胞-足细胞轴；足细胞；肿瘤坏死因子-α 　　[中图分类号] R363 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）07（a）-0007-05 　　过敏性紫癜（henoch-schonlein purpura，HSP）是一种以广泛小血管炎为基础的系统性血管炎病变，以皮肤紫癜、消化道黏膜出血、关节肿痛及血尿、蛋白尿等为主要临床表现。HSP导致的肾脏损害称为过敏性紫癜性肾炎（henoch-schonlein purpura nephritis，HSPN），发生率占20%～60%，直接影响HSP的病程及预后，严重者最终可导致慢性肾功能衰竭。据报道，异常糖基化的IgA1是HSPN的重要致病因素[1]，异常糖基化的IgA1不能被肝细胞识别清除，更易于自我聚集或形成抗原-抗体免疫复合物，并在系膜区和内皮下沉积[2]，触发系膜细胞的活化、增殖并释放多种细胞因子，导致系膜增生、细胞外基质分泌增多及肾小球纤维化形成等病理改变[3-4]。而在儿童HSPN疾病发展也存在着不同程度的足细胞损伤，主要有足细胞凋亡、足突融合等病理改变[5-6]。目前对于异常的IgA1是否能对足细胞产生影响的研究比较少见，且结果不尽相同，有研究者认为致病的IgA1可直接对足细胞产生影响[7-8]，但有学者认为IgA1不能直接影响足细胞，而是通过系膜细胞-足细胞轴作用对足细胞造成损伤的[9]。因此本研究拟通过观察细胞增殖及肿瘤坏死因子（TNF）-α的分泌情况探讨IgA1造成足细胞损伤的机制。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　选择2013年5～12月于河南中医学院第一附属医院儿科住院的40例HSPN患儿及同一时期的20名健康献血儿童作为研究对象。HSPN患儿符合临床HSPN诊断标准，临床分型属血尿及蛋白尿型，其中男23例，女17例，年龄6～13岁，平均（9.15±2.94）岁。除外系统性红斑狼疮、乙型病毒性肝炎等其他疾患。健康儿童献血者纳入健康儿童组，男8例，女12例，年龄5～11岁，平均（8.12±2.35）岁。近1个月无呼吸道、胃肠道等黏膜感染史，肝肾功能正常，无镜下血尿和蛋白尿。两组儿童性别、年龄比较差异无统计学意义（P 0.05），具有可比性。 　　1.2 主要试剂及材料 　　Agarose-Jacalin亲和填料购自Invitrogen公司，蜜二糖购自Aladdin公司，50 kD/2 mL超滤离心管购自Pall公司，胎牛血清（FBS）及RPMI1640均购自Gibco公司，噻唑蓝（MTT）购自Solarbio公司，小鼠TNF-α定量酶联检测试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司。 　　1.3 方法 　　1.3.1 血清IgA1的分离、纯化及鉴定 抽取患儿及健康儿童静脉血5 mL，室温下静置30 min后3000 r/min离心15 min，收集血清于-70℃冻存备用。采用Jacalin亲和层析联合Superdex-200分子筛层析法将血清纯化、分离得