小麦及其制品中转基因成分普通PCR和实时荧光PCR定性检验方法.docVIP

前 言 本标准的附录A为规范性附录, 附录B为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局。 本标准参与起草单位：天津出入境检验检疫局，中国检验检疫科学研究院，华中科技大学。 本标准主要起草人：栾凤侠、张洪祥、白月、李铁柱、程大明、邓立育、赵卫东、李莉、郑文杰、高勇、谢晓峰、黄文胜、徐宝梁、朱水芳、何光源。 本标准中如涉及国内已申请的专利，专利持有人声明放弃在中国境内的使用。 本标准系首次发布的国家标准。 小麦及其制品中转基因成分普通PCR和实时荧光PCR定性检验方法 范围 本标准规定了小麦及其制品转基因成分PCR检验中的术语和定义，原理，试剂和材料，仪器和设备，防污染措施，检测方法，结果表述和测试报告。 本标准适用于高分子量谷蛋白亚基转基因小麦品系B73-6-1，B72-8-11b，B102-1-2及其制品中转基因成分普通PCR和实时荧光PCR的定性检测，也适用于普通小麦的筛选检测。 本标准不适用于以小麦胚油为原料的深加工产品中转基因成分普通PCR和实时荧光PCR的定性检测。 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡注明日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 19495.1 转基因产品检测 通用要求和定义 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 GB/T 19495.3 转基因产品检测 核酸提取纯化方法 GB/T 19495.7 转基因产品检测 抽样和制样方法 术语、定义和缩略语 下列术语、定义和缩略语适用于本标准。 3.1 检测低限 limit of detection，LOD 定性方法的检测低限是指被检测物能被可靠检出的最低浓度或含量。 3.2 NOS：terminator of nopaline synthase gene from Agrobacterium tumefaciens 来源于农杆菌的胭脂碱合酶基因终止子。 3.3 uidA：Betaglucuronidase(GUS) reporter gene from E.coli,，enables a colorimetric assay in the laboratory to identify plant tissues which contain and express the gene 大肠杆菌β-葡萄糖醛酸糖苷酶基因（GenBank?编号：X05822）。 3.4 bar：phosphinothricin acetyltransferase gene from Bacillus amyloliquefacions 来源于杆菌Bacillus amyloliquefacions草丁瞵乙酰转移酶基因。 3.5 Ubiquintin 玉米泛素蛋白基因启动子（GeneBank?编号：AY572837.1）。 3.6 GAG56D：Triticm aestivum partial GAG56D gene for gamma-gliadin 小麦醇溶蛋白基因(GeneBank?编号：AJ389670),是小麦属特异性内源基因。 3.7 Wx012: Wheat waxiness（waxy） gene 小麦蜡质基因，是小麦物种特异性内源基因。 3.8 Ct：Cycle threshold 每个反应管内的荧光信号达到设定阈值时经历的循环数。 方法原理 样品经过提取DNA后，针对转基因小麦内外源基因所设计的引物和探针序列，分别通过PCR和实时荧光PCR技术，特异性扩增内外源基因的DNA片段，并根据PCR和实时荧光PCR扩增结果，判断该样品中是否含有转基因成分。 试剂和材料 除另有规定外，其它试剂为分析纯