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分析广金钱草总黄酮含量测定及还原Fe3 + 的能力 　　黄酮类化合物是自然界中一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分，具有很高的药用价值。黄酮类有效成分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果，无副作用，并以此开发出多种药品和保健食品。而黄酮类化合物是自然界中抗氧化作用最强的一类天然化合物，由于它具有很强的抑制活性氧、清除自由基作用，同时毒副作用相对小于化学合成药，因此黄酮类化合物一直是人们致力于寻找新药的重要研究领域。广金钱草Yerba Desmodii Styracilii 为豆科植物广金钱草Desmodium styracifolium ( Osb. ) Merr. 的干燥地上部分。盛产于广西、广东、福建等省，具有清热利湿，通淋排石之功效。性味甘、淡、凉，归肝、肾、膀胱经，用于热淋、砂淋、小便刺痛、黄疸尿赤、尿路结实等。《中华人民共和国共和国药典》和《中药大辞典》中记载，广金钱草含有生物碱、黄酮苷、酚类、鞣质等成分，从广金钱草中分到的黄酮主要为黄酮碳苷化合物夏佛塔苷( Schftoside) 、异牡荆素( Isovitexin) 、异荭草素( Isoorienton) 、6 - C - 木-26糖- 8 - C - 葡萄糖洋芹素( Vicenin - 1) 、6 - C - 葡萄糖- 8 - C - 木糖泽芹素( Vicenin - 3) 等。目前对广金钱草还原Fe3 + 的能力研究较少，本试验对广金钱草中黄酮类化合物进行了提取，分别通过紫外分光光度法和普鲁士兰法测定了其还原Fe3 + 的能力，为进一步研究广金钱草黄酮类化合物以及其深入开发利用提供理论依据。 　　1 仪器与试剂 　　1. 1 仪器 　　KQ5200DB 型数控超声波清洗器: 昆山市超声仪器有限公司; 可见分光光度计( 722N) : 上海民桥精密科学仪器有限公司; 电子天平: 上海舜宇恒平科学仪器有限公司; ZKJ - 1002 循环水式真空抽气泵:上海嘉鹏科技有限公司; 旋转蒸发器( RE - 52AA) :上海安亭实验仪器有限公司; HH - SA 数显恒温水浴锅: 上海上登实验设备有限公司等。 　　1. 2 试剂 　　无水乙醇AR ; 95% 乙醇AR; 盐酸AR; 磷酸氢二钠AR; 磷酸二氢钠AR; 铁氰化钾AR; 三氯乙酸AR; 三氯化铁AR 等。广金钱草采自广西百色市凌云县。 　　2 方法与结果 　　2. 1 总黄酮的提取 　　称取广金钱草干品约6 g，加80 mL 95% 乙醇，超声波提2. 5 h，抽滤。滤渣以同法提取2. 5 h 抽滤，两次滤液合并，用旋转蒸发仪浓缩至一定体积，将浓缩液转入100 mL 容量瓶中，用60% 乙醇稀释至刻度，得样品液。 　　2. 2 总黄酮的含量测定 　　2. 2. 1 波长的确定取0. 5 mL 样品液，在0. 30 mL 5% 亚硝酸钠溶液存在碱性条件下，加入10%硝酸铝溶液0. 30 mL，以试剂空白作参比液在400 ～ 700 nm 波长范围确定络合物的吸光度。本实验中络合物于410 nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。 　　2. 2. 2 标准曲线的绘制分别精确量取芦丁对照液( 0. 10mg /mL) 依次为0. 00，0. 50，1. 00，2. 00，3. 00，4. 00，5. 00 mL 于10mL 容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0. 30 mL，摇匀，静置6 min; 再加10% 硝酸铝溶液0. 30 mL，摇匀，静置6 min; 再加4% 氢氧化钠溶液4. 00 mL，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂空白作参比液，于410 nm 波长处测其吸光度，以对照液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标做标准曲线，建立回归方程。 　　2. 2. 3 提取物含量的测定精密吸取样品液0. 50 ml，置10 mL 容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A 为1. 716 根据回归方程A = 11. 6x - 0. 002，计算样品中总黄酮的含量C = 0. 148 mg /mL。 　　2. 3 总黄酮提取液 　　还原Fe3 + 能力( 普鲁士兰法)采用普鲁士兰法测定样品还原Fe3 + 能力。分别取5 支10mL 具塞比色管，依次加入不同浓度的样品溶液2. 5 mL，磷酸盐缓冲液( 0. 2 mol /L pH 值6. 6) 2. 5 mL 和1% 铁氰化钾2. 5 mL，混匀后置于50℃水浴中反应20min，然后加入10%三氯乙酸2. 5mL，混匀，如溶液浑浊离心( 3 000 r /min)