1，4-二羟基-9—10-蒽醌-2-醛缩-4-氟苯基氨基硫脲探针测定生物样品中蛋白质含量的光谱法.pdfVIP

第 4O卷 第 6期 河南师范大学学报 (自然科学版) Vo!．40 No．6 2O12年 11月 JournalofHenanNormalUniversity(NaturalScienceEdition) NOV．2012 文章编号 ：1000—2367(2012)06 0073—04 1，4一二羟基一9—10一蒽醌一2一醛缩一4一氟苯基氨基硫脲探针 测定生物样品中蛋白质含量的光谱法 安 鑫，时 蕾，郝二军，张巍耀，崔凤灵 (河南师范大学 化学化工学院，河南 新 乡 453007) 摘 要 ：在模拟人体生理条件下，基于1，4一二羟基一9—10蒽醌一2一醛缩一4一氟苯基氨基硫脲 (EDMHT)与人血清 白蛋 白(HsA)相互作用生成复合物 ，导致血清 白蛋 白的内源荧光产生特异性变化 ，且体系的同步荧光强度与溶液 中 HSA的浓度呈 良好的线性关系，从而建立 了以EDMHT为分子探针 ，用 固定波长 同步荧光光谱分析测定蛋 白质含 量 的新方法．体系荧光光谱特征及强度受 值 、pH、离子强度及试剂加入顺序等 因素 的影 响．在 20C，pH一7．4o Tris—HCI缓冲溶液及离子强度为 0．1mol／I的NaCI溶液 中，体系的 △ 值为 50nm 的同步荧光强度 (，)与人血清 白蛋 白在 5．52～276mg／I的浓度范围内呈现 良好 的线性关系．本实验对人血清、尿样 、唾液样 品进行 了测定，回收 率在 95．18 ～98．32 之问，对 11份空 白样 品进行平行测定 ，求得相对标准偏差为 2．87 ，方法 的检测限可达 0．348mg／I．实验结果表 明，本方法具有简单 、快速 、灵敏度较高，线性范 围宽，精密度和回收率较好等优点 ，可直接 用于生物样品中蛋 白质总量的测定 ，结果令人满意 ，有望用于生化分析和临床分析． 关键词 ：1，4一二羟基一9—10一蒽醌 2一醛缩一4一氟苯基氨基硫脲(EDMHT)；人血清白蛋白(HSA)；同步荧光光谱；分 子探针 中图分类号：0657．3 文献标志码 ：A 人血清 白蛋 白(HSA)是血浆 中含量最丰富的蛋 白质 ，也是最重要 的载体蛋 白．它可以作为许多外源性 和内源性化合物的存储和转运蛋 白口]．HSA具有维持血浆胶体渗透压 ]，控制血小板凝集 ，清除 自由基和抗 凝血等生理功能，其定量研究更是临床 中诸如恶性肿瘤，糖尿病 ，肾功能衰竭 ，肝硬化 ，结核病等疾病研究不 可缺少的内容．因此血清白蛋白的分析和测定对于临床医学 ，药学等行业具有非常重要 的意义 ]．目前进行 该类研究使用较多的分析方法有凯 氏定氮法 、分光光度法 j、荧光光度法[、化学发光法 、电化学法 和共振散射法 等．同步荧光光谱法作为一种新 的分子光谱技术 ，与普通荧光法相比，具有光谱简化 ，谱带 窄化和减小散射光影响等优点 ，已成功应用于多组分 的同步测定和生物分子的分析研究 中．我们基于以 l， 4一二羟基一9—10一蒽醌 2一醛缩一4一氟苯基氨基硫脲 (EDMHT)为荧光探针 ，运用 同步荧光光谱法测定 了人血清 ， 唾液和尿样中蛋白的含量 ，并作了回收实验．方法简便快捷 ，对临床 医学和药学分析具有一定的实用意义和 价值 ”]． 1 实验部分 1．1 试剂与仪器 FP一6200荧光分光光度计 (日本分光公司)；pH一3C型酸度计 (上海雷磁仪器厂)；BS一110S型电子天平 (北京赛多利斯公司)；9．34×10 mol／LEDMHT溶液 ；人血清 白蛋 白(HSA，华兰生物)配制成 2．0× 1Osmo1／I水溶液，置于 1～4℃冰箱中保存 ；Tris—HCl(Tris为三羟基甲基氨基 甲烷)缓冲溶液 (pH一7．4)． 人血清样 由河南师范大学校医院提供，尿样，唾液样来 自人体．实验用水均为二次去离子水，所用试剂均为分 收稿 日期 ：201206—10 基金项 目：国家 自然科学基金 ；河南省高校科技创新 团队支持计划 (2012IRTSTHN006) 作者简介 ：崔风灵 (1963一)，女 (满族)，山东郓城人 ，河南师范大学教授 ，博士，主要从事荧光分析 · 74