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1.植物原生质体融合技术和融合体成株研究虽有进展，但不成熟，难于广泛应用。需要研究出一套实用的融合技术和建立杂种细胞高效成株体系。从育种角度看，进行体细胞杂交时需注意： 有目的地选择亲本材料和多注意选择近缘种间的原生质体融合； 不仅要利用对称的体细胞杂种，而且要特别重视利用不对称杂种和胞质杂种，因为不对称杂种只是DNA重组没有额外的染色体，胞质杂种避免了胞质基因供方的野生性状进入杂种，其遗传性状稳定地遗传，最有希望成为能直接用于育种的简便途径。 展 望 * 2.在进行植物原生质体融合研究中，过去往往存在着只重视得到再生植株，不太重视再生植株数量、是否获得后代和对其观察及育种应用。故应提倡与育种者相结合。 3.原生质体融合作为植物的杂交手段，将会有效地应用于作物改良和新品种选育。 展 望 * * * * 目前，已有苹果、柑桔、梨、枣、猕猴桃、枇杷等果树获得胚乳植株。 * 植物离体培养的理论，源于19世纪30年代德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann提出的”细胞学说“，其主要观点：细胞是生物体的基本结构单位，由它构成整个生物个体；同时认为植物细胞又是在生理上、发育上具有潜在的全能性功能单位。Schwann还指出：”每一个细胞应该可以独立生活和发展，假如具有的条件正如它存在于有机体内一样…….“。 1902年德国著名植物学家Haberlandt根据细胞学说，提出高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞的观点，这种单个细胞是具有潜在的全能性功能单位。 * Knotte为Haberlandt的学生 Robbins为美国人 * White为美国人 * 琼脂是由海藻来的多糖物质。 * Steward为美国康乃尔大学工作的英国人，1948年即开始胡萝卜离体培养研究，1952年与同事共同设计出一种培养装置A（细胞繁殖器）。他们在胡萝卜组织培养过程中，观察到培养液常常变混浊，并查明是由于培养组织上散落的游离细胞和细胞团。1956年发表了可以利用愈伤组织液体产生悬浮细胞，悬浮细胞可以继代培养的论文。1968年他又报道，利用胡萝卜的次生韧皮部的悬浮培养物，在含椰乳的培养基中观察到类似胚胎发生的结构（胚状体）。由胚状体先长根，后长芽，并形成完整植株，为植物细胞全能性的理论提供了有力的实验证据。 * 甜椒杂种一代单核早期和双核期花粉，在冬季还有少量的诱导率，但春季诱导率为零。 天竺葵从2月龄植株上采集的花药，培养后平均有11.2%产生愈伤组织,而2年生的花药,只有2%产生愈伤组织。 * 低温作用机理：低温改变了小孢子第一次有丝分裂的轴向，从而使小孢子发育启动；延长了小孢子的生活力而提高诱导率；使绝大多数花粉保持存活并完成其诱导过程。主要是第一个机理。 花药材料的选取 　 选材关键在于选取花粉处于合适发育期的花药，离体培养后才能启动花粉发育。实践表明，从减数分裂期至双核期的花药，均有可能诱导离体孤雌发育。 大多数园艺植物的花药培养，成功率最高的时期为单核期，或单核中晚期。 * 花药培养技术步骤 选幼年树花蕾 取下花蕾 3-5度低温冷处理3-10天 取花药 镜检 消毒接 种培养 再生 * 花粉培养 50年代开始裸子植物花粉培养，获得愈伤组织； 50、60年代被子植物花粉培养失败； 1974年Nitsch等次曼陀罗和烟草花粉获得植株 花粉培养的优点 从少量花粉获得大量花粉植株； 避免花药壁产生的体细胞愈伤组织干扰，直接观察小孢子发育过程； * 花粉培养技术步骤 药壁向花粉提供营养物质； 通过药壁吸收、贮存和转化培养基中的外源物质 选幼年树花蕾 取下花蕾 （镜检） 预培养数天 取花药 接种 分离 花粉 低温预处理 消毒 过滤离心 再生 * 影响花药（粉）培养的因素 供体基因型差异和发育差异 甜椒、天竺葵 旺盛植株，早期花蕾 花药（花粉）的生理状态 花粉发育期 四分体期、小孢子早期、中期和晚期（单核靠边期）、有丝分裂期和双核花粉期 利用花粉和花药培养于育种时，需足量供选择单倍体植株。故如何提高诱导形成率十分重要。培养条件很关键。 * 培养前低温预处理 培养基与培养方式的影响 花药、花粉培养前和培养初期的短期高温、低温、离心、减压等。 3-5?C3-10天，提高小孢子反应能力：曼陀罗、天仙子、柑桔 花药培养采用最多的培养基为MS。我国科学工作者研制的N6和马铃薯培养基； 液体悬浮培养比固体培养基好； 细胞分裂素有利于花粉胚形成； 早期要求高蔗糖浓度：5-10% * 再生植株倍性和单倍体植株的保存及其加倍 在通过花药培养获得的再生植株中，除单倍体植株外，非单倍体出现的频率与植物种类、再生途径以及培养基的成分有关。一般来说，在通过胚状体途径获得的再生植株中，其单倍体植株