家蚕过敏原Profilin的表达、纯化、免疫学鉴定及其生物信息学分析.pdf

doi：10．3969／j．issn．1000-484X．2017．O1．016 家蚕过敏原 Profilin的表达、纯化、免疫学鉴定及其生物信息学分析① 胡 维 梁志林 王 良录② 钟慧玲 刘志刚 (深圳大学过敏反应与免疫学研究所，深圳 518060) 中图分类号 11392．8 文献标志码 A 文章编号 1000-484X(2017)01-0081-04 [摘 要] 目的：克隆表达家蚕(Bombyxmori)Profilin蛋白，鉴定其免疫原性并进行B细胞抗原表位预测和构建分子进 化树。方法：从 NCBI上获取家蚕Profilin蛋 白的基因序列 ，合成该基因并构建到pet一28a表达载体上，重组质粒转化至 E．coli BL21，IPTG诱导基因表达，通过亲和层析获取高纯度蛋白；用 Westernbtot方法对重组蛋 白进行过敏原性鉴定；通过DNAStar 软件分析其潜在的B细胞抗原表位；应用 MEGA5．05进行序列比对 ，并构建分子进化树。结果：成功表达出重组蛋白，且重组 蛋白与家蚕过敏患者血清有一定的IgE结合。结论：成功克隆表达出具有免疫原性的Profilin蛋白，并成功预测出其B细胞抗 原表位和构建出分子进化树。 [关键词] 家蚕 ；Profilin蛋白；过敏原 Expression，purifcation andbioimformaticsanalysisofallergen protein Profilin from silkworm (Bombyxmori) HUWei，LIANGZhi—Lin，WANGLiang—Lu，ZHONGHui—Ling， Zhi一 ．InstitueofAllgeryandImmunology， SchoolofMedicineofShenzhenUnive~ity，Shenzhen518060，China [Abstract] Objective：ToobtainrecombinantProfilinofsilkworm，identifyitsimmunogenicity，predictitsBcellepitopesand constructtheevolutionarytrees．M ethods：ThenucleotidesequenceofPmfilinwasacquiredfrom NCBI，synthesizeditandclonedit intopET-28vector．Then，therecombinantplasimidsweretransfomr edtoE．coliBI21．AfterinducedbyIPTG，recombinantproteinwas purifiedbyAffinitychromatography．Fuahedy，itsallergenicitywasidentifiedbyWesternblot，thepotentialB cellepitopeswasanalyzed throughDNAStarand build the evolutionary trees by MEGA5．05．Results：The recombinantprotein ofProfilin wassuccessfully expressedandpurifiedbyaffinitychromatorgaphy．Besides，theproteincontainsahighIgE—bindingactivitywithIgEexistinginserum of patientsallergicto silkwomr ．Conclusion：Therecombinnatproflilin hasIgE—binding activity，and itismeaningfulforfundamental researchnadspecificdiagnosisstudiesofallergicdiseasescausedbysilkwomr ． [Keywords] Silkworm；Profilinprotein；Allergen 变态反应疾病已成为当今全球关注的重要公共 5000年历史，家蚕的广泛养殖以及随之而来的蚕丝 卫生问题 j。各国变态反应性疾病的总发病率为 用品的大量使用家蚕过敏的报道时有发生 ’。 10％～30％ 。过敏性哮喘是一种很重要的变态 2014年，印度 Nagar~通过比较研究 120名缫