HPLC测定结核灵片中狼毒乙素的含量论文.docVIP

　　HPLC测定结核灵片中狼毒乙素的含量论文 【摘要】 目的 建立测定结核灵片中狼毒乙素含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent HCC18,流动相为甲醇水（体积比70∶30），流速1.0 mL/min，检测波长291 nm，柱温为室温。结果 狼毒乙素质量浓度在0.606～ 7.278 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.999 8；平均回收率为100.20%，RSD为0.29%（n=6）。结论 本方法简便、准确，可用于测定结核灵片中狼毒乙素的含量。 【关键词】 结核灵片 狼毒乙素 HPLC 结核灵片收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十三册中.freelL量瓶中，加水5 mL，振摇使成稠膏，加入甲醇35 mL，摇匀，超声20 min，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液,即得。 2.2 阴性样品的制备 用密度为1.32～1.36(60～65 ℃)的淀粉浆代替清膏，按结核灵片的生产工艺及供试品溶液的制备方法制备，即得。 2.3 对照品溶液的制备 精密称取狼毒乙素对照品0.012 13 g，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为狼毒乙素对照品储备液（121.3 μg/mL）。再精密量取2 mL，置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为狼毒乙素对照品溶液（2.426 μg/mL）。 2.4 色谱条件 色谱柱为Agilent HCC18（4.6 mm×250 mm，5 μm，安捷科技公司）；柱温室温；流动相为甲醇水（体积比70∶30）；流速为1.0 mL/min；检测波长为291 nm，进样量为20 μL；在该色谱条件下，理论板数按狼毒乙素计算大于2 000，狼毒乙素与杂质峰可达基线分离，分离度大于1.5。色谱图见图1。 2.5 标准曲线的绘制 分别精密吸取上述对照品储备液（121.3 μg/mL）0.5、1.0、2.0、4.0、6.0 mL，分别置100 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为0.606、1.213、2.426、4.852、7.278 μg/mL的系列溶液。分别精密吸取20 μL进样，按上述色谱条件测定，记录色谱图。以狼毒乙素质量浓度（ρ）为横坐标，狼毒乙素峰面积（A）为纵坐标作图，得回归方程：A=158577ρ-5459.2,.freelL范围内与峰面积线性关系良好。 2.6 重复性试验 取同一批结核灵片(批号070701)，按“2.1”项下制备方法平行制备6份供试品溶液，分别依法进样，测得峰面积并计算含量，结果测得平均含量为0.01439%，RSD为0.34%。 2.7 稳定性试验 取供试品溶液20 μL，分别在0、2、5、7、10、12 h进样，共测5次，结果测得狼毒乙素含量的RSD值为0.31%，表明供试品溶液在12 h内测定稳定。 2.8 回收率试验 取同一批结核灵片(批号070701) 粉末1 g，精密称定，共6份，分别置50 mL量瓶中，精密加入狼毒乙素对照品储备液（121.3 μg/mL）2 mL，按“2.1”项下方法制备溶液，并进样测定，计算平均回收率为100.20%, RSD为0.29%（n=6）。见表1。 A.狼毒乙素对照品; B.供试品; C.阴性对照样品 图1 结核灵片高效液相色谱图（略） Figure 1 HPLC chromatograms of Zieheling pills 表1 狼毒乙素加样回收率试验结果（略） Table 1 Results of recovery test 2.9 含量测定及含量限度 分别精密称定6批结核灵片各3份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法进样测定，结果见表2。因狼毒是毒性中药材，有必要确定含量限度，建议每片结核灵片含狼毒乙素为0.028 8 ～0.043 2 mg/片。 表2 样品含量测定结果（略） Table 2 Assay results of samples 3 讨论 3.1 狼毒药材的化学成分主要包括黄酮、二萜、香豆素类等［2］，其中狼毒乙素对结核杆菌有明显的抑制作用［3］，因此选择狼毒乙素作为结核灵片含量测定的指标成分。 3.2 曾以甲醇作溶剂，但提取效果不理想；也尝试用流动相作溶剂，提取效果理想，但狼毒乙素受结核灵片中的其他成分干扰，达不到良好的分离效果。 3.3 实验中还考察了不同柱温(10、20、30、40 ℃)对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果、保留时间的影响无明显区别，因此确定以柱温为室温。 【