五氯酚钠生物降解菌的初步筛选.pdfVIP

第27卷 湖北师范学院学报(自然科学版) Vo1．27 第1期 Journal of Hubei Normal University(Natural Science) No．1，2007 五氯酚钠生物降解菌的初步筛选 石 鹤 (湖北师范学院生物系，湖北黄石 435002) 摘要：用五氟酚钠浓度梯度培养基平板，从土样中筛选五氟酚钠耐受菌；再以五氟酚钠为唯一碳源进行摇 瓶培养，筛选五氟酚钠降解茵。以不同浓度的五氯酚钠药物培养基对五氟酚钠降解菌的耐受能力进行测 定。结果筛选出对五氟酚钠的耐受能力为0．8 g／L的菌株，并能以五氟酚钠为唯一碳源生长的细菌3株。 关键词：五氟酚钠；生物降解茵；筛选 中图分类号：X592 文献标识码：A 文章编号：1009—2714(2007)ol一0080—04 五氯酚钠(PCP—Na)是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会 造成严重的环境污染。PCP—Na对人体、动物有较高毒性，易造成脏器损伤而危害人类健康。吸人 PCP—Na会产生呼吸道过敏反应，引起支气管炎，严重时甚至导致死亡；皮肤接触PCP—Na，会引起 皮肤烧伤、过敏反应和皮炎；．误食PCP—Na，导致人体严重伤害甚至死亡；眼睛接触PCP—Na，可能 导致眼睛烧伤…。因此采用一定的方式降解五氯酚钠，对保护人类健康、消除环境污染意义重大。 在提倡绿色环保的大前提下，采用生物降解的途径势在必行。 微生物对污染物质的代谢、转化及降解作用，是当今环境污染研究中最活跃的领域之一。1981 年Tabak等人就报道了ll4种单环、多环、卤代芳烃、有机氯杀虫剂等被微生物降解和转化。最近研 究工作已从一般寻找降解、转化污染物的微生物，转入微生物降解代谢途径、酶系的研究和遗传控制 的探讨，特别是证实了降解某些烃的酶系基因在质粒上后，导人质粒，构建具有特殊功能高效降解能 力的遗传工程菌，为降解菌的定向育种，开辟了一条新的途径。这对利用微生物降解环境污染中的物 质使环境自净，无疑将起重要作用 。 本研究采用五氯酚钠浓度梯度培养基平板，从土样中筛选五氯酚钠耐受菌；然后以五氯酚钠为唯 一 碳源进行摇床培养，筛选五氯酚钠降解菌；再用不同浓度的五氯酚钠药物培养基测试其最大耐受能 力，筛选出耐受能力好，降解程度高的五氯酚钠降解菌。 1 材料和方法 “ 1．1 材料 1．1．1 样品 实验土样采自大冶铜绿山古铜矿遗址，此处曾用五氯酚钠进行过古坑木的防腐处理。 1．1．2 培养基 A．牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaC1 5g，琼脂15g～20g，水 1000mL，PH 7．0～7．5． B．药物培养基：将一定量五氯酚钠加入到牛肉膏蛋白胨培养基中制成。 C．五氯酚钠浓度梯度平板：在无菌培养皿中，先倒人7mL～10mL含0．1g／L五氯酚钠的牛肉膏 收稿日期：2Oo6—O2—12 作者简介：石 鹤(1958一 )，男，湖北黄石人，副教授。 · 8O· 蛋白胨培养基，将培养皿一侧置于木条上，使培养皿中培养基倾斜成斜面，且刚好完全盖住培养皿底 部；待培养基凝固后，将培养皿放平，再倒人7mL～10mL牛肉膏蛋白胨培养基。 D．以五氯酚钠为单碳源的液体培养基：K2HPO 1．6g，KH2PO 0．4g，MgSO 0．06mg，FeSO 3mg， CuSO 0．05mg，ZnSO 0．05mg，NH C1 1．0g，五氯酚钠 (若干)，水 1000mL，PH7．0． 1．2 方法 1．2．1 五氯酚钠耐受菌株的初选 采用浓度梯度平板法筛选，即按1．1．2中c的方法制成五氯酚钠 浓度梯度平板，将采集的土样溶解于无菌水中，摇匀，取上清液涂布于五氯酚钠梯度平板上，30℃培养 2d，挑取高含药区的菌落，斜面保藏，编号，备用。由于在培养基中药物浓度呈由低到高的梯度方式分 布，平板上长成的菌落也呈现由密到稀的梯度分布，而高浓度药物区生长的少数菌落一般具有较强的 抗药性。 1．2．2 以五氯酚钠为单碳源的菌株的初选 用250 mL摇瓶，按1．1．2中D配方，五氯酚钠的浓度分 别按0．2g／L，0．4g／L，0．6g／L，0．8g／L，1．0g／L，1．2g／L，每菌株、每药