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骨膜细胞成骨能力和复合移植研究进展【摘要】 骨膜含有成骨和软骨的骨系祖细胞群，能在适当的条件下形成骨和软骨。近年实验和临床研究证明，体外培养的骨膜细胞及体内移植的骨膜细胞都保持着成骨能力，移植到骨缺损处可促进骨形成。本文就目前国内外对骨膜细胞成骨能力、骨膜细胞和载体的复合研究及其在口腔颌面骨修复中的应用研究作一综述 【关键词】 骨膜细胞 成骨能力 复合移植 骨缺损 骨修复 由于创伤、炎症和肿瘤等各种原因造成的骨组织缺损后的修复重建，是当今医学研究的难点之一。长期以来，自体骨移植是修复骨缺损的常用方法，然而自体骨移植因存在着骨数量有限和供区受损等问题，在临床上的应用受到很大的限制[1]。近年来，人们把目光投向了骨组织工程这个新兴领域，利用生物学和工程学的原理和方法，将成骨细胞和载体材料复合移植入体内，达到修复骨缺损的目的。骨组织工程的首要环节是充足的成骨细胞来源。骨膜源性细胞（periosteum-derived cells,PDC）具有很强的增殖能力和分化成骨潜能[2]，而且，取材方便，对患者造成的创伤小，成为骨组织工程理想种子细胞来源之一。目前，将骨膜细胞体外培养扩增，结合适当的生物材料，移植入体内促进骨组织修复，已成为骨组织工程研究领域的一大热点。本文就目前国内外对骨膜细胞成骨能力、骨膜细胞和载体的复合研究及其在口腔颌面骨修复中的应用研究作一综述 1 骨膜细胞成骨依据 骨膜是一种非均质膜结构，包括外部的纤维层和内部的生发层。纤维层含有成纤维细胞，生发层含有骨祖细胞、成骨细胞和破骨细胞。体外实验发现，骨膜生发层细胞具有较强的成骨分化能力，纤维层细胞成骨能力较差，但强于腱成纤维细胞[3]。体内实验表明，骨和软骨的形成源于生发层细胞的增殖和分化[4]，但近年有学者将兔的胫骨骨膜移入到肌肉中，发现骨膜纤维层形成软骨细胞和骨组织，生发层却出现坏死、消失，这与上述报道不一致[5]。因此，关于骨膜源性成骨细胞的来源还需要进一步的了解 2 骨膜细胞的体外培养和成骨鉴定 成骨细胞的分离和培养是骨组织工程细胞移植的基础。已有多项实验证实，体外培养的骨膜细胞能够分化为成骨细胞或软骨细胞,进而形成骨组织,这为骨膜细胞成为骨组织工程种子细胞提供了理论和实验依据。骨膜成骨细胞的鉴定主要有以下几种指标：细胞形态、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（osteocalcin, OCN）、矿化结节和Ⅰ型胶原[6] Declercq等培养大鼠胫骨骨膜细胞，观察到最初细胞为成纤维状形态，ALP表达较低，随着培养时间的推移，细胞慢慢呈现为鹅卵圆形,ALP活性增加，矿化结节形成，并表达Ⅰ型胶原和OCN [6] 。有实验发现，骨膜细胞的形态与其成骨能力有一定相关性：小圆形细胞比成纤维状细胞具有更高的成骨分化潜能[3，7]。而且，骨膜细胞具有间充质多分化潜能，自我更新能力强，不受供体年龄影响，体外传代30次仍保持明显增殖能力，经成骨诱导分化后，表达明显的成骨特征，ALP水平增高,大量矿化结节形成[8]。以上研究表明，体外培养的骨膜细胞具有较高的增殖和成骨分化能力，为体外扩增骨膜细胞并将其植入体内促进骨形成奠定了实验基础 3 单纯骨膜细胞体内移植 培养的骨膜细胞体外表达成骨特征，若将其移植入体内，在理论上能形成骨组织，修复骨缺损，很多学者对此展开了研究，并取得成功。Takushima等将兔骨膜细胞悬液注入到人工造成的胫骨骨裂缝处，术后可见裂隙处细胞大量增殖，并有明显的新骨形成[9]。刘建平等临床上将培养的骨膜细胞自体注射到骨不连患者的骨缺损处，术后x线证实在骨折处有骨痂形成，骨折愈合加快，达到了促进骨愈合的目的[10]。以上实验均说明自体骨膜细胞移植具有促进骨缺损修复的作用，但是，应用自体骨膜细胞直接注射到骨折部位或骨缺损部位，因缺少支持物，而无法控制移植细胞的位置和骨形成的形态，可能导致骨异位形成。因此，目前很多学者开展了骨膜细胞与载体复合的研究 4 骨膜细胞与复合载体研究 细胞外基质-载体材料是骨组织工程研究的重点内容，载体能为细胞提供生存空间，使细胞获得足够的营养物质，进行气体交换，并使细胞按预制形态三维生长。研究表明，细胞体内形成的新骨特征与其使用的载体种类有关[11]。同时，由于骨膜细胞分化程度较低，能在体外大量扩增，从而成为研究细胞和生物材料相互作用的理想成骨细胞来源[7]。目前已用作骨膜细胞载体的材料种类繁多，包括羟基磷灰石（hydroxyapatite, HA）、胶原(Collagen)、聚乙醇酸（polyglycolide,PGA）、聚乳酸（polylactic acid，PLA)及它们的复合物(polyglycolide-polylactid acid,PLGA