薄层色谱-荧光法测定黄连生物碱分配系数.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报 第4期 2011年4月 ChineseJournalof 572～575 AnalyticalChemistry 薄层色谱一荧光法测定黄连生物碱分配系数 贺凯1 李学刚2 陈红英2 叶小利¨ 邓亚飞2 陈新2 孙胜亮1 1(西南大学生命科学学院，重庆400715)2(西南大学药学院药用资源化学研究所，重庆400716) 摘 要建立了薄层色谱和荧光分析法测定黄连生物碱在高速逆流色谱溶剂体系中分配系数的方法。样品 在溶剂体系中分配平衡后，取等量的上下相，经点板、展开、刮板，提取后用荧光分光光度法检测样品的荧光值 (激发波长365rim,发射波长409nm)，并计算样品在溶剂体系中的分配系数。在一定的浓度范围内，4种生物 碱的含量与荧光强度呈良好的线性关系，加样回收率为94．7％～104．1％；相对标准偏差为1．9％～3．8％。本方 法测定的分配系数与I-IPLC法无显著性差异。本方法准确度高，耗时少，应用范围广。 关键词薄层色谱；荧光分析；高速逆流色谱；分配系数；溶剂体系 1 引 言 逆流色谱(Counter-current 术。1982年，It0等利用螺旋管的特殊的同步行星式运动模式发展了目前广泛应用的高速逆流色谱 counter-current (High-speed 用范围广；无需固体载体，不会出现吸附、污染以及样品损失等现象；产品纯度高；适用于制备型分离【”。 HSCCC的分离效果取决于溶剂系统的正确选择。溶剂体系是否适用于样品的分离，极大程度取决于被 分离样品在此溶剂体系中的分配系数K，即溶质在固定相中的浓度(CB)同溶质在流动相中的浓度(Cm) 之比。HSCCC最合适的K值范围是0．5≤K≤1．0，K值太小，出峰时间太快，物质之间分离度差；K值过 大，出峰时间太长，峰形变宽121。目前，由于缺少行之有效的方法对两相溶剂体系进行筛选，限制了高速 逆流色谱的应用嘲。 目前，已有的选择HSCCC溶剂体系的方法各有优缺点。薄层色谱法嘲，操作简单快速，但仅凭肉眼 观测样品在体系中的分配情况，无法选出最佳的溶剂体系；HPLC法，分别取上、下相用HPLC测定，求 出各组分的峰面积从而得到各组分在两相中的分配系数，该法是较为常用且比较准确的K值的测定方 法。但是当HPLC的分离条件未知时，选择HPLC的流动相及洗脱方式是一项较繁琐的工作，且HPLC 法直接进样对色谱柱污染大；紫外分光光度法，对目标成分有紫外吸收的样品适用，但检测灵敏度低且 样品中不同物质的吸收不同，结果不准确[51；分析型HSCCC法，仪器体积小、分析速度快，但从诸多的溶 剂体系中选择比较耗时；生物活性物质分配比率法，只适于具有生物活性的物质，且需要较长时间[1]。 本研究结合了薄层色谱法与荧光分光光度法的优点，测定了黄连中生物碱在HSCCC溶剂体系中的分 配系数，取得了准确可靠的结果。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)，XW-80A旋涡混合器(上海厦美公司)，薄层硅胶G板(青岛 海洋化工公司)；紫外仪(上海安亭公司)。黄连生物碱标准品由本实验室提供，纯度≥98％，乙腈为色谱 纯，其余试剂均为分析纯。 2010-09-13收稿；2010-11-15接受 项目(No．CSTC2010AC5007)和中央高校基本科研业务费专项(No．XDJK2009C095)资助 ‘E-mail：Yexiaoli2002@yahoo．com．gll 第4期 贺凯等：薄层色谱一荧光法测定黄连生物碱分配系数 573 2．2 实验方法 2．2．1标准液、样品液和待测液的制备(1)标准液制备精确称取黄连碱、表小檗碱、巴马汀、小檗碱 min(100 对照品各2 mL无水乙醇超声溶解5 kHz)，0℃储存备用。(2)样品液制备取黄连一 mg，用4 70％乙醇提取浸膏6 mL无水乙醇中，超声5rain(100 碱)，溶解在4