脱氢表雄酮对实验性自身免疫性神经炎大鼠细胞免疫的.docVIP

　　脱氢表雄酮对实验性自身免疫性神经炎大鼠细胞免疫的 【摘要】 目的: 探讨脱氢表雄酮（DHEA）对实验性自身免疫性神经炎（EAN）大鼠细胞免疫反应的影响。方法:　21只Leg治疗组、 2 mg治疗组和对照组, 治疗组于注射牛周围神经髓磷脂（BPM）抗原乳剂后第5天开始每日皮下注射DHEA, 对照组皮下注射相同体积的DHEA溶媒。疾病高峰期检查坐骨神经IFNγ、 TNFα阳性反应细胞, 检测引流淋巴结和脾脏单个核细胞增殖反应, 检测培养上清TNFα、 IFNγ、 IL10含量。结果: 两种剂量DHEA治疗组均能减少坐骨神经IFNγ、 TNFα阳性反应细胞数目(Plt;0.05), 抑制BPM刺激T淋巴细胞增殖(Plt;0.05), 降低培养上清中IFNγ、 TNFα水平(Plt;0.05)。各组间 IL10水平差异无统计学意义（Pgt;0.05）。结论: DHEA可抑制EAN大鼠自身反应性T淋巴细胞增殖和促炎性细胞因子过度表达, 抑制细胞免疫反应。 【关键词】 脱氢表雄酮 神经炎 实验性自身免疫性 细胞免疫 　　脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone, DHEA）是3种肾上腺皮质类固醇之一, 是雌激素和雄激素的前体物质, 也是目前尚不明确的多种免疫调节性类固醇的前体物质。体内、 外研究证实DHEA及其代谢产物具有抗炎、 抗增殖和免疫调节活性, 对人和动物的免疫系统可产生有益的作用［1］。DHEA能改善病毒、 细菌或其他感染实验动物的存活率［2］; 尘螨诱导的变应性气道疾病小鼠服用DHEA, 可降低支气管灌洗液中嗜酸细胞数目, 降低IL4、 IL5、 IFNγ和IgE水平［3］; 超生理浓度的DHEA可抑制T细胞受体介导的体外T淋巴细胞增殖, 使KLH致敏脾脏细胞IL4生成增加、 IFNγ水平下降［4］; 系统性红斑狼疮患者服用DHEA治疗, 表现出明显的病情改善, 对糖皮质激素治疗需求量减少［5］。上述研究提示DHEA影响细胞和体液免疫应答。实验性自身免疫性神经炎（experimental autoimmune neuritis, EAN）是CD4+ T细胞介导的外周神经自身免疫性脱髓鞘疾病, 是公认的研究格林巴利综合征（GBS）的经典动物模型, 目前国内外尚未见有DHEA影响EAN免疫反应的报道。基于以往体内外研究证实的DHEA对免疫系统的作用, 我们应用DHEA干预发病初期EAN大鼠, 观察对细胞免疫反应的影响, 以探讨治疗GBS的新方法。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 DHEA、 二甲基亚砜、 弗氏不完全佐剂均购自SigmaAldrich公司; H37Ra株热灭活结核杆菌、 植物血凝素（PHA）购自Difco公司; 免疫组化用一抗购自R＆D公司, 二抗购自Invitrogen公司; Ficocl淋巴细胞分离液、 RPMI1640培养液、 胎牛血清均购自Gibco公司; 3H甲基胸腺嘧啶核苷购自中国原子能研究所; 酶联免疫分析试剂盒购自Bender MedSystem, Inc公司。超速离心法自牛脊神经根提取周围神经髓磷脂（bovine peripheral myelin, BPM）; Leg/剂治疗组（T1）、 2 mg/剂治疗组(T2)和对照组(C), 每组7只。大鼠经适应性饲养1周（SPF级）, 氯胺酮（10 mg/kg）麻醉, 将BPM、 H37Ra株热灭活结核杆菌和生理盐水制成混悬液, 与等量弗氏不完全佐剂充分乳化, 100 μL抗原乳剂（含BPM 5 mg、 结核杆菌 1 mg）注入双侧后肢足垫皮下。自免疫后第5天开始皮下注射DHEA, 体积50 μL, 每日1次。对照组每日皮下注射相同体积的DHEA溶媒二甲基亚砜。 　　1.2.2 免疫组化检查 于免疫后16 d（EAN高峰期）处死大鼠, 取坐骨神经近脊髓段, 40 g/L多聚甲醛固定, 石蜡包埋, 纵行切片（5～6 μm, 每根神经2张连续切片）, 常规脱蜡致水, 30 mL/L过氧化氢阻断内源性过氧化物酶活性, 枸橼酸（pH6.0）抗原修复, 100 mL/L牛血清白蛋白封闭, 滴加一抗室温下60 min。一抗为羊抗大鼠IFNγ、 TNFα多克隆抗体, 二抗为辣根过氧化酶标记兔抗山羊IgG, DAB显色, 苏木苏复染, 脱水, 透明, 封固。应用计算机图像分析系统40倍物镜下采集图像, 每张切片随机取5个视野, 观察大鼠坐骨神经中细胞阳性反应, 细胞核周围呈棕黄色的浸润炎性细胞、 施万细胞、 血管内皮细胞计数为阳性反应细胞, 取其平均值, 结果以细胞数/mm2组织表示。 　　1.2.3 体外淋巴细胞增殖试验 取免疫后16 d EAN大鼠腹股沟、 腘窝淋巴结和脾脏, 过钢网研磨制备单个细胞悬